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小鼠精原干细胞体外培养与冷冻技术研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
文献综述第12-25页
 第一章 小鼠精原干细胞与支持细胞研究进展第12-25页
   ·小鼠精原干细胞的研究进展第12-21页
     ·小鼠精原干细胞的发生第12-13页
     ·小鼠精原细胞的类型第13页
     ·小鼠精原干细胞的生物学特性第13-14页
     ·小鼠精原干细胞的生理学特性第14页
     ·小鼠精原干细胞的形态学特征第14-15页
     ·小鼠精原干细胞的分离与纯化第15-17页
     ·小鼠精原干细胞的鉴定、培养、诱导与冷冻保存第17-21页
   ·饲养层支持细胞的研究进展第21-23页
     ·小鼠睾丸支持细胞的生物学特性第21页
     ·小鼠饲养层支持细胞的功能第21-22页
     ·小鼠睾丸支持细胞与精原干细胞的关系第22页
     ·小鼠睾丸支持细胞的分离第22页
     ·小鼠睾丸支持细胞的鉴定第22-23页
     ·小鼠睾丸支持细胞的体外培养第23页
   ·促生长因子对精原干细胞增殖作用的影响第23-24页
     ·LIF 对精原干细胞体外增殖作用的影响第23页
     ·GDNF 对小鼠精原干细胞体外增殖作用的影响第23-24页
   ·小鼠精原干细胞体外培养研究的目的与意义第24-25页
试验研究第25-58页
 第二章 小鼠精原干细胞的分离与纯化研究第25-31页
   ·试验材料第25-26页
     ·试验动物及处理第25页
     ·试验试剂第25页
     ·设备与器械第25-26页
     ·试剂配制第26页
   ·试验方法第26-28页
     ·小鼠睾丸单细胞悬液的制备第26-27页
     ·台盼蓝拒染法检测细胞活率第27页
     ·四次反复差速贴壁法分离纯化精原干细胞第27-28页
   ·试验结果与分析第28-29页
     ·形态学观察第28页
     ·台盼蓝染色第28页
     ·碱性磷酸酶(AKP)染色第28-29页
   ·讨论第29-30页
     ·两步酶消化法获取睾丸单细胞悬液第29页
     ·精原干细胞常用的分离纯化方法第29-30页
   ·小结第30-31页
 第三章 小鼠精原干细胞的鉴定研究第31-36页
   ·试验材料第31-32页
     ·试验动物及处理第31页
     ·试验试剂第31页
     ·设备与器械第31页
     ·试剂配制第31-32页
   ·试验方法第32-34页
     ·小鼠睾丸单细胞悬液的制备第32页
     ·小鼠睾丸支持细胞的制备第32页
     ·四次反复差速贴壁分离纯化小鼠精原干细胞第32页
     ·小鼠精原干细胞(SSCs)的形态学鉴定第32页
     ·碱性磷酸酶(AKP)染色第32页
     ·Beta-actin 和 N9113 基因RNA 分离提取和RT-PCR第32-33页
     ·引物设计第33-34页
     ·PCR 扩增第34页
   ·试验结果与分析第34-35页
     ·形态学鉴定第34页
     ·碱性磷酸酶(AKP)染色结果第34-35页
   ·讨论第35页
   ·小结第35-36页
 第四章 小鼠精原干细胞体外培养研究第36-46页
   ·试验材料第36-38页
     ·试验动物及处理第36页
     ·试验试剂第36页
     ·设备与器械第36-37页
     ·试剂配制第37页
     ·小鼠睾丸液的制备第37-38页
   ·试验方法第38-39页
     ·基础培养液第38页
     ·培养液Ⅰ第38页
     ·培养液Ⅱ第38页
     ·试验处理方式第38-39页
   ·统计分析第39页
   ·试验结果与分析第39-43页
     ·单因子培养对精原干细胞的增殖作用第39页
     ·双因子配伍培养对精原干细胞的增殖作用第39-40页
     ·三因子配伍培养对精原干细胞的增殖作用第40-42页
     ·睾丸液对小鼠精原干细胞增殖的影响第42-43页
   ·讨论第43-45页
   ·小结第45-46页
 第五章 小鼠精原干细胞冷冻研究第46-58页
   ·试验材料第46-47页
     ·试验动物及处理第46页
     ·试验试剂第46页
     ·设备与器械第46页
     ·试剂配制第46页
     ·LDL 的制备第46-47页
     ·LDL 溶液的配制第47页
     ·卵磷脂溶液的配制第47页
     ·海藻糖溶液的配制第47页
   ·试验方法第47-48页
     ·冷冻保护剂第47-48页
     ·精原干细胞的冷冻方法第48页
   ·统计分析第48-49页
   ·试验结果与分析第49-55页
     ·不同冷冻保护剂对小鼠精原干细胞冷冻复苏率的影响第49-51页
     ·不同冷冻保护剂配伍对小鼠精原干细胞冷冻复苏率的影响第51-55页
   ·讨论第55-57页
   ·小结第57-58页
结论与创新点第58-60页
参考文献第60-69页
致谢第69-70页
作者简介第70页

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