| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 技术路线 | 第10-11页 |
| 材料与方法 | 第11-34页 |
| 1 材料 | 第11-19页 |
| ·酵母双杂交系统材料 | 第11-17页 |
| ·细胞学实验材料 | 第17-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-34页 |
| ·诱饵蛋白(BAIT)构建 | 第19-20页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA片段(博大泰克试剂盒法) | 第20页 |
| ·PCR产物的回收(天根试剂盒法) | 第20页 |
| ·目的片段及载体DNA的酶切 | 第20-21页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA片段(博大泰克试剂盒法) | 第21页 |
| ·酶切产物的纯化(天根试剂盒法) | 第21页 |
| ·纯化的酶切产物和酶切载体进行连接 | 第21-22页 |
| ·化学感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·连接产物转化化学感受态细胞 | 第22页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第22页 |
| ·重组质粒的PCR及酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的序列分析 | 第23页 |
| ·酵母双杂交筛选随机多肽文库 | 第23-24页 |
| ·诱饵蛋白筛选非磷酸化随机多肽文库(顺序转化法) | 第24-25页 |
| ·阳性克隆DNA序列的获得 | 第25-26页 |
| ·酵母双杂交筛选CDNA文库 | 第26页 |
| ·关键位点突变实验 | 第26-27页 |
| ·细胞学实验 | 第27-30页 |
| ·细胞裂解 | 第30页 |
| ·免疫共沉淀 | 第30-31页 |
| ·蛋白电泳 | 第31-32页 |
| ·蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜(湿式转膜) | 第32页 |
| ·杂交与显色 | 第32-33页 |
| ·肽段体外干扰实验 | 第33页 |
| ·荧光能量转移实验 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-42页 |
| 1 随机多肽文库筛选到结合GRB7 SH2结构域的非磷酸化肽段 | 第34-36页 |
| 2 人骨髓CDNA文库筛选到结合GRB7 SH2结构域的序列 | 第36-37页 |
| 3 结合GRB7 SH2结构域时,22个氨基酸模序中两端保守序列起重要作用 | 第37页 |
| 4 免疫共沉淀实验证实非磷酸化肽段41结合GRB7 SH2结构域 | 第37-38页 |
| 5 BRET检测到非磷酸化肽段10,41结合GRB7 SH2结构域 | 第38-40页 |
| 6 非磷酸化配体41-A与磷酸化配体可干扰GRB7 SH2结构域结合肽段41 | 第40-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录 | 第49-73页 |
| 1 酵母双杂交结果 | 第49-52页 |
| 2 MRLUC测序结果 | 第52-53页 |
| 3 EYFP测序结果 | 第53页 |
| 4 GRB7 SH2结构域筛选到的人骨髓CDNA文库克隆测序 | 第53-54页 |
| 5 非磷酸化肽段测序 | 第54-62页 |
| 6 免疫共沉淀和WESTERN BLOT结果原图 | 第62-64页 |
| 7 构建与MRLUC融合的ERBB3 CDNA质粒测序结果 | 第64-67页 |
| 8 EXPASY网站上列出的蛋白Q9NPP6的相互作用模式图及与GRB7蛋白相互作用蛋白 | 第67-68页 |
| 9 BRET实验原始数据 | 第68-73页 |
| 表9.1 BRET原始数据(一) | 第68-71页 |
| 表9.2 BRET原始数据(二) | 第71-73页 |
| 综述 GRB7蛋白的研究进展 | 第73-95页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 个人简历 | 第95-96页 |
| 在读期间待(已)发表文章 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
