| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·NADH 氧化酶来源、结构及底物偏好 | 第11-13页 |
| ·NADH 氧化酶的菌种来源与结构 | 第11-13页 |
| ·NADH 氧化酶的底物偏好 | 第13页 |
| ·NADH 氧化酶的生理作用和反应机理研究 | 第13-15页 |
| ·NOX 在胞内的生理作用研究 | 第13-14页 |
| ·反应机理研究 | 第14-15页 |
| ·NADH 氧化酶分离纯化研究 | 第15-16页 |
| ·NADH 氧化酶分子克隆研究 | 第16页 |
| ·NADH 氧化酶应用进展 | 第16-19页 |
| ·辅酶再生 | 第16-18页 |
| ·人工调节 NOX 酶活，调控胞内代谢通路 | 第18-19页 |
| ·NADH 氧化酶的应用前景 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第20页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第20-21页 |
| 第二章 产 NADH 氧化酶乳酸菌的筛选、分离和鉴定 | 第21-31页 |
| ·材料和方法 | 第21-27页 |
| ·培养基和溶液 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·乳酸菌的筛选与分离 | 第23页 |
| ·菌种培养与活化 | 第23-24页 |
| ·NADH 氧化酶的粗提取 | 第24页 |
| ·NADH 紫外吸收标准曲线的测定 | 第24页 |
| ·NADH 氧化酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| ·NADH 氧化酶高酶活菌株的筛选 | 第25页 |
| ·乳酸菌 16S rDNA 鉴定 | 第25-27页 |
| ·乳酸菌核基因组的提取 | 第25-26页 |
| ·通用引物 | 第26页 |
| ·PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·纯化扩增 PCR 产物 | 第27页 |
| ·16s rDNA 序列测定与分析 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-30页 |
| ·NADH 紫外吸收标准曲线 | 第27-28页 |
| ·NADH 氧化酶高酶活菌株的筛选 | 第28页 |
| ·乳酸菌核基因组和 16S rDNA PCR 结果 | 第28-30页 |
| ·乳酸菌基因组的提取结果 | 第28-29页 |
| ·乳酸菌 16S rDNA PCR 结果 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 NADH 氧化酶基因的克隆 | 第31-44页 |
| ·材料和方法 | 第31-37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·材料和试剂 | 第32-33页 |
| ·pMD 18-T 载体 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·nox 基因目的片段的获得 | 第33-37页 |
| ·PCR 引物的设计和合成 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段的切胶纯化 | 第34-35页 |
| ·目的片段的 T 连接 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的筛选及提取 | 第36-37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-43页 |
| ·nox 基因的获得 | 第37-38页 |
| ·pMD18-T-nox 载体克隆质粒和 PCR 检测 | 第38-39页 |
| ·pMD18-T-nox 质粒载体的提取 | 第38页 |
| ·重组 T 载体 PCR 检测 | 第38-39页 |
| ·nox 基因的编码蛋白 | 第39-41页 |
| ·稀有密码子分析 | 第41页 |
| ·密码子偏好性分析 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 nox 基因在大肠杆菌中的表达 | 第44-54页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44页 |
| ·表达载体 pET-32a(+)和分子常用试剂 | 第44-45页 |
| ·常用溶液的配制 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·带酶切位点 nox 目的基因片段的获得 | 第46-47页 |
| ·PCR 引物的设计和合成 | 第46-47页 |
| ·PCR 扩增 | 第47页 |
| ·重组表达载体 pET-32a(+)-nox 的构建 | 第47-48页 |
| ·表达载体的制备 | 第47页 |
| ·目的片段和载体的双酶切 | 第47-48页 |
| ·载体与目的片段的体外连接 | 第48页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5a | 第48页 |
| ·重组子的筛选和质粒提取 | 第48页 |
| ·宿主菌 BL21（DE3）pLysS 的转化 | 第48页 |
| ·重组质粒 pET-32a(+)-nox 的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组大肠杆菌的培养与诱导表达 | 第49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-53页 |
| ·nox 目的基因片段的 PCR 结果 | 第49-50页 |
| ·表达载体 pET-32a(+)和目的片段 nox 双酶切鉴定结果 | 第50页 |
| ·双酶切片段的连接物检测 | 第50-51页 |
| ·连接物转化 DH5a 提取质粒检测结果 | 第51页 |
| ·重组子 pET-32a(+)-nox 双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·表达 NADH 氧化酶的 SDS-PAGE 及酶活测定 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-56页 |
| ·基本结论 | 第54-55页 |
| ·主要创新点 | 第55页 |
| ·进一步研究的建议 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
