| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 引言 | 第9页 |
| 第1章 综述 | 第9-18页 |
| ·糖尿病概述 | 第9-11页 |
| ·糖尿病的现状 | 第9-10页 |
| ·糖尿病类型及特点 | 第10页 |
| ·糖尿病的治疗手段 | 第10-11页 |
| ·苦瓜的药理作用 | 第11-15页 |
| ·苦瓜概述 | 第11-12页 |
| ·苦瓜的药理性质 | 第12-14页 |
| ·苦瓜中的降血糖活性成分 | 第14页 |
| ·苦瓜降糖多肽P | 第14-15页 |
| ·苦瓜的降血糖作用机理 | 第15-16页 |
| ·促进β细胞分泌胰岛素 | 第15页 |
| ·类胰岛素作用 | 第15-16页 |
| ·抑制葡萄糖的吸收 | 第16页 |
| ·抑制β细胞凋亡、促进β细胞增值和修复 | 第16页 |
| ·胰腺外作用 | 第16页 |
| ·苦瓜降血糖药物的应用前景及面临的挑战 | 第16-17页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-29页 |
| ·材料与试剂 | 第18-21页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·细菌培养基 | 第19页 |
| ·缓冲液 | 第19-20页 |
| ·菌种 | 第20-21页 |
| ·载体 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-29页 |
| ·苦瓜种子总RNA提取 | 第21页 |
| ·RT-PCR | 第21-22页 |
| ·cDNA末端快速扩增(RACE) | 第22-24页 |
| ·苦瓜基因组DNA提取——改良CTAB法 | 第24页 |
| ·染色体步移(Genome Walking) | 第24-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第26页 |
| ·菌体破碎 | 第26页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第26-27页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27页 |
| ·融合蛋白Ni-NTA纯化 | 第27页 |
| ·Western blotting | 第27-28页 |
| ·Bradford法检测蛋白浓度 | 第28-29页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第29-60页 |
| ·苦瓜种子总RNA提取 | 第29-33页 |
| ·分光光度法检测提取的苦瓜种子RNA的纯度 | 第29页 |
| ·提取的苦瓜种子总RNA的电泳检测 | 第29-31页 |
| ·保温法检测总RNA的稳定性 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR进行RNA完整性检测 | 第32-33页 |
| ·简并PCR获取多肽P基因中间片段 | 第33-35页 |
| ·苦瓜多肽P基因cDNA末端快速扩增(RACE)结果分析 | 第35-39页 |
| ·3'RACE结果分析 | 第37-38页 |
| ·5'RACE结果分析 | 第38-39页 |
| ·苦瓜基因组DNA的提取 | 第39-41页 |
| ·分光光度法检测提取的苦瓜基因组DNA的纯度 | 第40页 |
| ·提取的苦瓜基因组DNA的电泳检测 | 第40-41页 |
| ·染色体步移(Genome Walking)法克隆苦瓜多肽P基因未知末端 | 第41-54页 |
| ·第一次3'-末端染色体步移结果分析 | 第41-43页 |
| ·第二次3'-末端染色体步移结果分析 | 第43-45页 |
| ·第一次5'-末端染色体步移结果分析 | 第45-47页 |
| ·第二次5'-末端染色体步移结果分析 | 第47-50页 |
| ·内含子鉴定 | 第50-54页 |
| ·成熟多肽P编码序列的获取 | 第54-55页 |
| ·重组多肽P的表达与纯化 | 第55-58页 |
| ·pET32a-polypeptide P表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组多肽P的表达及纯化 | 第56-58页 |
| ·重组多肽P的Western blotting鉴定 | 第58页 |
| ·重组多肽P的药理研究 | 第58-60页 |
| 第4章 结论与展望 | 第60-62页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| ·展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
