| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-30页 |
| ·稻瘟病与稻瘟病菌 | 第11-17页 |
| ·稻瘟病菌的生活史 | 第12页 |
| ·稻瘟病菌的侵染循环 | 第12-13页 |
| ·稻瘟病菌是丝状病原真菌研究的模式生物 | 第13-17页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化 | 第17-24页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第17-18页 |
| ·ATMT在丝状真菌上的应用现状 | 第18-20页 |
| ·根癌农杆菌(T-DNA)介导真菌遗传转化的机理 | 第20-22页 |
| ·根癌农杆菌介导的丝状真菌转化的特点 | 第22-24页 |
| ·根癌农杆菌介导丝状真菌转化的常规方法 | 第24页 |
| ·侧翼序列克隆技术研究 | 第24-29页 |
| ·反向PCR技术 | 第25-26页 |
| ·TAIL-PCR热不对称交错PCR | 第26页 |
| ·外源接头PCR | 第26-27页 |
| ·本实验室常用的侧翼序列克隆改进方法 | 第27-29页 |
| ·本研究的意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-46页 |
| ·实验菌株、质粒与培养条件 | 第30页 |
| ·培养基及抗生素 | 第30-32页 |
| ·常规分子生物学实验技术 | 第32-35页 |
| ·PCR反应 | 第32页 |
| ·酶切反应 | 第32-33页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第33页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第34-35页 |
| ·CTAB法提取质粒DNA | 第35页 |
| ·农杆菌的冻融法转化 | 第35-36页 |
| ·农杆菌AGL-1电感受态制备 | 第35-36页 |
| ·pATMT1质粒的电转化 | 第36页 |
| ·质粒PCR验证 | 第36页 |
| ·稻瘟病菌的T-DNA转化 | 第36-37页 |
| ·转化子DNA提取与分析 | 第37-43页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第37-38页 |
| ·T-DNA插入的分子检测 | 第38-41页 |
| ·Southern杂交分析 | 第41-43页 |
| ·T-DNA插入侧翼序列的测序与插入位点的分析和验证 | 第43-44页 |
| ·突变子的表型分析 | 第44-46页 |
| ·生长速度与产孢量 | 第44页 |
| ·孢子萌发与附着胞形成观察 | 第44页 |
| ·致病性测定 | 第44-45页 |
| ·稻瘟病菌的有性生殖交配试验 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-63页 |
| ·双元载体pATMT1导入农杆菌 | 第46页 |
| ·稻瘟病菌的T-DNA转化 | 第46-48页 |
| ·方法优化 | 第46-47页 |
| ·诱导培养 | 第47-48页 |
| ·选择培养基中抗生素的选择 | 第48页 |
| ·转化效率 | 第48页 |
| ·突变体的检测 | 第48-49页 |
| ·突变体插入稳定性检测 | 第48页 |
| ·转化子潮霉素PCR检测 | 第48-49页 |
| ·突变体致病性测定结果 | 第49页 |
| ·T-DNA插入侧翼序列的扩增 | 第49-56页 |
| ·嵌套式反向PCR扩增Al-192左臂侧翼序列 | 第49-51页 |
| ·HiTAIL-PCR扩增Al-139侧翼序列 | 第51-56页 |
| ·致病缺陷突变体Al-192和Al-139分析 | 第56-63页 |
| ·致病性测定 | 第56-58页 |
| ·Al-192、Al-139突变体的表型分析 | 第58-61页 |
| ·Al-192、Al-139突变体的T-DNA插入拷贝数 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |