| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 1 绪论 | 第15-31页 |
| ·课题背景 | 第15-16页 |
| ·启动子的克隆方法研究进展 | 第16-19页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第16-17页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第17-18页 |
| ·利用载体或接头的染色体步行技术克隆基因启动子 | 第18页 |
| ·通过构建及筛选基因组文库来克隆启动子 | 第18-19页 |
| ·花色素的生物合成以及F3H基因在其中的作用 | 第19-22页 |
| ·花色素的种类和特征 | 第19页 |
| ·花色素的生物合成途径及相关基因 | 第19-21页 |
| ·F3H基因及其启动子的研究进展 | 第21-22页 |
| ·隐花色素(CRY)的研究概况 | 第22-23页 |
| ·CRY的发现 | 第22页 |
| ·CRY的生理功能 | 第22-23页 |
| ·RNAi技术在植物基因功能组学研究中的应用 | 第23-26页 |
| ·RNA干涉现象的发现 | 第23-24页 |
| ·双链RNA干涉的分子机制 | 第24-25页 |
| ·RNA干涉技术在植物功能基因组研究中的应用 | 第25-26页 |
| ·利用农杆菌介导的遗传转化系统在芸薹属中的应用 | 第26-31页 |
| ·转化机理 | 第27页 |
| ·影响转化效率的各种因素 | 第27-29页 |
| ·筛选标记 | 第29页 |
| ·目的基因的研究 | 第29页 |
| ·芜菁相近作物通过农杆菌介导遗传转化体系的研究 | 第29-31页 |
| 2 "津田"芜菁F3H基因启动子区的克隆与分析 | 第31-44页 |
| ·试验材料 | 第31页 |
| ·供试材料、菌株、抗生素及质粒 | 第31页 |
| ·酶和试剂 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-34页 |
| ·"津田"芜菁总DNA的提取(CTAB法) | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·PCR扩增F3H启动子区序列 | 第32页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的连接 | 第33页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第33页 |
| ·筛选后鉴定阳性转化子 | 第33-34页 |
| ·F3H基因启动子区序列的功能预测 | 第34页 |
| ·F3H基因启动子序列中各功能元件的预测 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-42页 |
| ·F3H启动子区的克隆 | 第34-35页 |
| ·回收片段的比对分析 | 第35-37页 |
| ·"津田"芜菁F3H启动子区的序列分析 | 第37-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·F3H启动子区的克隆 | 第42页 |
| ·F3H启动子区功能元件的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 3 "津田"芜菁F3H启动子区的瞬时表达分析 | 第44-57页 |
| ·试验材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·菌种及质粒 | 第44页 |
| ·酶和试剂 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·PCR引物 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-50页 |
| ·利用Gateway克隆系统构建F3H启动子区表达载体 | 第45-48页 |
| ·表达克隆转化农杆菌LBA4404感受态细胞 | 第48-49页 |
| ·农杆菌侵染 | 第49页 |
| ·组织化学染色法检测GUS活性 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·attB-PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测及回收 | 第50页 |
| ·BP反应阳性克隆检测 | 第50-51页 |
| ·LR反应阳性克隆PCR检测 | 第51-52页 |
| ·表达克隆转化农杆菌LBA4404 | 第52页 |
| ·瞬时表达的结果与分析 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第54页 |
| ·F3H启动子表达的空间特性 | 第54-55页 |
| ·F3H启动子表达的光调控 | 第55页 |
| ·下一步的研究方向 | 第55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 4 "津田"芜菁CRY1基因的克隆及其功能初步分析 | 第57-71页 |
| ·试验材料 | 第57-58页 |
| ·供试材料、菌株、抗生素及质粒 | 第57页 |
| ·酶和试剂 | 第57-58页 |
| ·试验方法 | 第58-62页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·"津田"芜菁总RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·CRY1基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·所克隆序列的同源性和结构域预测 | 第60页 |
| ·Northern-blot研究"津田"芜菁不同光环境下CRY1的表达 | 第60-61页 |
| ·酵母双杂交研究"津田"芜菁CRY1和COP1的相互作用 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-68页 |
| ·"津田"芜菁总RNA的提取 | 第62-64页 |
| ·"津田"芜菁CRY1基因的同源性分析及功能预测 | 第64-66页 |
| ·不同波长的光下"津田"芜菁CRY1基因的表达 | 第66-67页 |
| ·"津田"芜菁CRY1与COP1的相互作用 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·"津田"芜菁CRY1基因的克隆及生物信息学分析 | 第68-69页 |
| ·"津田"芜菁CRY1基因的表达分析及其与COP1的相互作用 | 第69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 5 芜菁CRY1-dsRNAi载体的构建及其遗传转化 | 第71-99页 |
| ·试验材料 | 第71-72页 |
| ·供试材料、菌株、抗生素及质粒 | 第71-72页 |
| ·酶和试剂 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·试验方法 | 第72-81页 |
| ·利用Gateway技术构建CRY1-dsRNAi表达载体 | 第72-75页 |
| ·CRY1-dsRNAi植物表达载体转化农杆菌 | 第75-76页 |
| ·外植体的获得与接种方式 | 第76页 |
| ·"津田"芜菁离体再生各影响因素的研究方法 | 第76-77页 |
| ·"津田"芜菁遗传转化各影响因素的研究方法 | 第77-78页 |
| ·试验结果的记录及统计分析 | 第78页 |
| ·农杆菌介导转化"津田"芜菁 | 第78页 |
| ·转化植株的分子生物学鉴定 | 第78-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-94页 |
| ·利用Gateway技术构建CRY1-dsRNAi载体 | 第81-84页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第84-85页 |
| ·影响"津田"芜菁离体再生的因素 | 第85-88页 |
| ·影响"津田"芜菁遗传转化的因素 | 第88-91页 |
| ·转化植株的获得 | 第91-92页 |
| ·转化植株的分子生物学检测 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| ·CRY1-dsRNAi植物表达载体的构建 | 第94页 |
| ·影响"津田"芜菁离体再生的因素 | 第94-95页 |
| ·影响"津田"芜菁遗传转化的因素 | 第95-97页 |
| ·转化植株的分子生物学鉴定 | 第97页 |
| ·本章小结 | 第97-99页 |
| 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-112页 |
| 附录 | 第112-116页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
