| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 绪论(极化细胞紧密连接研究进展) | 第14-69页 |
| ·紧密连接的结构 | 第14-18页 |
| ·紧密连接中的跨膜蛋白 | 第18-22页 |
| ·外围膜蛋白 | 第22-25页 |
| ·紧密连接MAGUK蛋白的结构与功能 | 第25-34页 |
| ·紧密连接蛋白的分子间相互作用 | 第34-37页 |
| ·紧密连接的分子装配 | 第37-39页 |
| ·紧密连接的多种功能 | 第39-44页 |
| ·紧密连接在细胞增殖、分化及基因表达方面的作用 | 第44-48页 |
| ·紧密连接中的信号传导 | 第48-55页 |
| ·血脑屏障中的紧密连接 | 第55-58页 |
| ·结语 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 第二章 人类ZO2蛋白质第二个PDZ结构域的溶液结构和功能的研究 | 第69-157页 |
| 第一部分 背景知识 | 第69-82页 |
| ·三维空间的结构域交换 | 第69-82页 |
| ·三维空间的结构域交换的概念 | 第69-70页 |
| ·三维空间的结构域交换的研究背景 | 第70-71页 |
| ·三维空间的结构域交换的生物学意义 | 第71-73页 |
| ·三维空间的结构域交换的特点 | 第73-78页 |
| ·铰链的柔性和差异性 | 第78-79页 |
| ·铰链的长度和三维空间结构域交换的倾向 | 第79页 |
| ·三维空间的结构域交换的机制 | 第79-80页 |
| ·失控的三维空间结构域交换可能是淀粉样纤维形成的机制 | 第80-81页 |
| ·结语 | 第81-82页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第82-122页 |
| ·试剂和抗体 | 第82页 |
| ·人ZO-1及ZO-2蛋白PDZ2结构域基因的亚克隆 | 第82-87页 |
| ·目标基因的获得 | 第82-84页 |
| ·PCR产物连入pGEM-T载体进行目的片段的扩增 | 第84-86页 |
| ·pET-22b(+)与目标基因的连接 | 第86-87页 |
| ·人ZO-1,ZO-2蛋白质第二个PDZ结构域的表达与纯化 | 第87-89页 |
| ·蛋白质分子量鉴定 | 第89-92页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第89-92页 |
| ·质谱 | 第92页 |
| ·蛋白纯度及均一性鉴定 | 第92-93页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第93页 |
| ·PDZ结构域的二级结构特性的光谱学研究 | 第93-94页 |
| ·采用毛细管等电聚焦电泳测定等电点 | 第94页 |
| ·Western Blotting | 第94-95页 |
| ·免疫共沉淀 | 第95-96页 |
| ·细胞培养 | 第96-97页 |
| ·细胞转染 | 第97页 |
| ·FPLC液相色谱 | 第97-98页 |
| ·沉降速率分析 | 第98页 |
| ·利用DSS对His-融合蛋白进行交联 | 第98页 |
| ·激光动态光散射 | 第98-99页 |
| ·原子力显微镜方法 | 第99页 |
| ·NMR实验 | 第99-111页 |
| ·主链顺序认证及侧链化学位移的获得 | 第102-105页 |
| ·氢氘交换实验 | 第105页 |
| ·同位素过滤实验 | 第105-110页 |
| ·化学位移干扰实验 | 第110-111页 |
| ·NMR结构计算 | 第111-113页 |
| ·NMR波谱解析人ZO-2-PDZ2的三维溶液空间结构 | 第113-122页 |
| ·N-标记和N,C双标记蛋白质的表达 | 第113-114页 |
| ·NMR实验与数据变换 | 第114-115页 |
| ·主链顺序认证及侧链化学位移的获得 | 第115-118页 |
| ·二级结构的确定 | 第118页 |
| ·结构计算 | 第118-122页 |
| 第三部分 实验结果 | 第122-157页 |
| ·成功构建了22个重组质粒 | 第122-123页 |
| ·PDZ结构域蛋白的表达和纯化 | 第123-124页 |
| ·PDZ结构域蛋白的分子量鉴定 | 第124-126页 |
| ·小肽电泳 | 第124-125页 |
| ·质谱 | 第125-126页 |
| ·PDZ结构域蛋白的二级结构特性的CD光谱学研究 | 第126-128页 |
| ·用毛细管等电聚焦电泳测定等电点 | 第128页 |
| ·ZO2-PDZ2的化学位移认证 | 第128-129页 |
| ·ZO2-PDZ2的氢氘交换实验 | 第129页 |
| ·ZO2-PDZ2的二级结构分析 | 第129-132页 |
| ·氮标蛋白和非标蛋白间的滴定结果 | 第132-134页 |
| ·ZO1-PDZ2和ZO2-PDZ2之间及它们自身的相互作用 | 第134-137页 |
| ·ZO1-PDZ2和ZO2-PDZ2在溶液中可以形成紧密的同二聚体和异二聚体 | 第137-142页 |
| ·ZO2-PDZ2的NMR结构解析 | 第142-147页 |
| ·ZO2-PDZ2二聚体的结构描述 | 第147-149页 |
| ·ZO2-PDZ2同二聚体的界面 | 第149页 |
| ·ZO1-PDZ2和ZO2-PDZ2寡聚的证据 | 第149-152页 |
| ·讨论 | 第152-157页 |
| 参考文献 | 第157-163页 |
| 附录1 蛋白质化学位移认证结果 | 第163-177页 |
| 附录2 分子间的距离约束 | 第177-192页 |
| 附录3 分子间的氢键约束 | 第192-194页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第194-195页 |
| 致谢 | 第195-196页 |
