| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 Ras对gankyrin调控的验证及gankyrin转化模型的建立 | 第13-23页 |
| 材料与方法 | 第13-19页 |
| 1 材料及来源 | 第13-14页 |
| ·细胞株、质粒 | 第13页 |
| ·试剂 | 第13-14页 |
| ·仪器 | 第14页 |
| ·抗体 | 第14页 |
| 2 实验方法 | 第14-19页 |
| ·细胞培养 | 第14页 |
| ·gankyrin表达载体的构建 | 第14-16页 |
| ·细胞转染 | 第16页 |
| ·稳定表达gankyrin的NIH3T3细胞的筛选 | 第16-17页 |
| ·Western blot分析 | 第17页 |
| ·结晶紫实验 | 第17-18页 |
| ·软琼脂实验 | 第18-19页 |
| 结果与讨论 | 第19-22页 |
| 1.Ras对gankyrin表达调控的验证 | 第19-20页 |
| 2.Gankyrin表达载体的构建及表达鉴定 | 第20-21页 |
| 3.Gankyrin转化能力的检测 | 第21-22页 |
| 小结 | 第22-23页 |
| 第二部分 Ras和gankyrin转化的NIH3T3细胞蛋白组学分析 | 第23-38页 |
| 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1 材料及来源 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·细胞系 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-28页 |
| ·双向电泳蛋白质样品的制备 | 第24页 |
| ·双向电泳 | 第24-25页 |
| ·染色 | 第25页 |
| ·凝胶图像采集与分析 | 第25页 |
| ·蛋白点肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF)鉴定 | 第25-26页 |
| ·电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)鉴定蛋白质 | 第26-28页 |
| 结果与讨论 | 第28-37页 |
| 1.Ras转化,gankyrin转化及对照组NIH3T3细胞蛋白差异表达图谱的建立 | 第28-29页 |
| 2.差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第29-33页 |
| 3.差异表达蛋白的功能分类 | 第33-34页 |
| 4.变化趋势相同蛋白质的分析 | 第34-36页 |
| 5.与细胞转化及肿瘤相关差异蛋白质的分析 | 第36-37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 第三部分 在蛋白水平验证变化趋势相同蛋白质 | 第38-45页 |
| 材料与方法 | 第38-42页 |
| 1.材料 | 第38-39页 |
| ·细胞系 | 第38页 |
| ·试剂及仪器 | 第38-39页 |
| ·细胞培养试剂 | 第39页 |
| ·抗体 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| ·Western blot分析 | 第39页 |
| ·RNA提取 | 第39-40页 |
| ·反转录 | 第40页 |
| ·RT-PCR反应体系 | 第40-42页 |
| 结果与讨论 | 第42-44页 |
| 1.变化趋势相同蛋白质的Western Blot验证 | 第42-43页 |
| 2.变化趋势相同蛋白质的RT-PCR检测 | 第43-44页 |
| 小结 | 第44-45页 |
| 第四部分 gankyrin对Ras转化NIH3T3细胞的介导作用 | 第45-51页 |
| 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1 材料及来源 | 第45-46页 |
| ·细胞株、质粒 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45-46页 |
| ·抗体 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·gankyrin干涉表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·细胞转染 | 第47-48页 |
| ·稳定表达gankyrin RNAi的Ras转化NIH3T3细胞的筛选 | 第48页 |
| ·Western blot分析 | 第48-49页 |
| 结果与讨论 | 第49-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 总结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 英文缩略词 | 第58-60页 |
| 文章发表与交流 | 第60-68页 |
