| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 综述 | 第13-26页 |
| 一 呼肠孤病毒及其研究进展 | 第13-19页 |
| ·呼肠孤病毒科简介 | 第13页 |
| ·禽呼肠孤病毒简介 | 第13页 |
| ·番鸭呼肠孤病毒的研究现状 | 第13-14页 |
| ·分子生物学特性 | 第14-15页 |
| ·禽呼肠孤病毒病疫苗研究情况 | 第15-16页 |
| ·常用动物疫苗的种类 | 第16-19页 |
| 二 基因疫苗研究进展 | 第19-22页 |
| 1. 疫苗的产生背景 | 第19页 |
| 2. 基因疫苗的免疫机理 | 第19-20页 |
| 3. 核酸疫苗的特点 | 第20页 |
| ·免疫效果好 | 第20页 |
| ·危险性低 | 第20页 |
| ·免疫应答持久，可提供联合免疫 | 第20页 |
| ·方法简便，价格低廉 | 第20页 |
| ·易于贮藏和运输 | 第20页 |
| 4. 基因疫苗的优化 | 第20-21页 |
| ·质粒载体的选择 | 第20-21页 |
| ·抗原及抗原表位的选择 | 第21页 |
| 5. 基因疫苗的接种方法 | 第21-22页 |
| 三 酶联免疫吸附试验(ELISA)概述 | 第22-25页 |
| 1. 应用范围 | 第22页 |
| 2. 免疫酶技术的原理 | 第22页 |
| 3. 酶联免疫吸附试验(ELISA)的类型 | 第22-25页 |
| ·间接法 | 第23页 |
| ·双抗体夹心法 | 第23-24页 |
| ·竞争法 | 第24-25页 |
| ·捕获包被法测抗体 | 第25页 |
| 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第一章: 表达禽(番鸭)呼肠孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗的构建 | 第26-34页 |
| 1. 材料 | 第27-28页 |
| ·菌种及其质粒 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·酶及相关试剂 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28页 |
| 2.方法 | 第28-32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·目的基因的获得 | 第29页 |
| ·目的基因回收 | 第29-30页 |
| ·选择合适载体及载体处理，分别对载体pCI进行双酶切 | 第30-31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·质粒转化 | 第31页 |
| ·抗生素筛选 | 第31-32页 |
| ·质粒 DNA的提取 | 第32页 |
| 3. 结果 | 第32-34页 |
| 第二章: 抗体、酶标二抗的制备及间接ELISA检测番鸭呼肠孤病毒抗体方法的建立 | 第34-40页 |
| 一. 抗原的制备 | 第35-38页 |
| 1 材料与方法 | 第35页 |
| 2. 抗体的制备 | 第35-37页 |
| ·阳性血清的制备(一抗) | 第35-36页 |
| ·阴性血清的制备 | 第36页 |
| ·二抗(兔抗番鸭)阳性血清的制备 | 第36-37页 |
| 3. 二抗(兔抗番鸭)的酶标 | 第37页 |
| 4. 结果 | 第37-38页 |
| ·一抗阳性血清的质量鉴定 | 第37页 |
| ·二抗阳性血清的质量鉴定 | 第37页 |
| ·酶标二抗的质量鉴定 | 第37-38页 |
| 二. 间接ELISA检测番鸭呼肠孤病毒抗体方法的建立 | 第38-40页 |
| 1. 材料与方法 | 第38页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·最佳包被抗原浓度与最佳反应血清浓度的选择 | 第38页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的选择 | 第38页 |
| ·临界值的确定 | 第38页 |
| 2. 结果 | 第38-40页 |
| ·最佳包被抗原浓度与最佳反应血清浓度的选择(方阵法) | 第38-39页 |
| ·酶标二抗工作浓度的选择(方阵法) | 第39页 |
| ·临界值的确定 | 第39-40页 |
| 第三章: 表达禽(番鸭)呼肠孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗的免疫效力监测 | 第40-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·病毒 | 第41页 |
| ·雏番鸭 | 第41页 |
| ·DNA疫苗质粒 | 第41页 |
| ·HI阳性抗原 | 第41页 |
| ·DAN疫苗的大量提取和纯化 | 第41页 |
| ·碱裂解法提质粒 | 第41-43页 |
| ·雏番鸭的免疫 | 第43页 |
| ·攻毒 | 第43页 |
| ·抗体检测 | 第43-44页 |
| 2. 实验结果 | 第44-48页 |
| ·抗体转阳 | 第44页 |
| ·抗体水平 | 第44-47页 |
| ·发病和死亡情况 | 第47-48页 |
| 第四章: 表达禽(番鸭)呼肠孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗不同免疫佐剂添加后免疫效果的比较 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·病毒 | 第51页 |
| ·雏番鸭 | 第51页 |
| ·DNA疫苗质粒 | 第51页 |
| ·HI阳性抗原 | 第51页 |
| ·雏番鸭的免疫 | 第51页 |
| ·攻毒 | 第51页 |
| ·抗体检测 | 第51-52页 |
| 2. 实验结果 | 第52-57页 |
| ·抗体转阳 | 第52页 |
| ·抗体水平 | 第52-56页 |
| ·发病和死亡情况 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
