| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 符号和缩略词 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 上篇 文献综述 | 第18-62页 |
| 第一章 植物基因工程中标记基因的研究进展 | 第18-23页 |
| 1 转基因作物的安全性 | 第18-20页 |
| 2 安全的标记基因 | 第20-21页 |
| 3 植物转基因中最广泛应用的报告基因gus | 第21-23页 |
| 第二章 全基因化学合成的策略、方法和应用的研究进展 | 第23-44页 |
| 1 早期的基因全合成的策略 | 第24-26页 |
| ·退火和连接的策略 | 第24-25页 |
| ·互为模板同时合成两个基因的策略 | 第25页 |
| ·鸟枪法合成基因 | 第25-26页 |
| 2 基因全合成进一步的发展 | 第26-34页 |
| ·合成单链的策略 | 第28-29页 |
| ·模板直接连接PCR方法 | 第29-30页 |
| ·基于PCR方法的DNA序列合成 | 第30-31页 |
| ·结合PCR和连接的策略 | 第31-34页 |
| 3 最新基因全合成的策略 | 第34-39页 |
| ·基于PCR的一步合成法 | 第34-36页 |
| ·连续延伸PCR基因合成方法 | 第36-37页 |
| ·基于PCR的二步合成法 | 第37-38页 |
| ·合成单元结合连接的方法合成长DNA序列家族 | 第38-39页 |
| 4 高通量化学合成寡核苷酸链的进展 | 第39-40页 |
| 5 合成基因中使用的软件 | 第40-41页 |
| 6 基因全合成的应用 | 第41-44页 |
| 第三章 基因体外定向分子进化的策略和应用研究进展 | 第44-62页 |
| 1 体外定向分子进化的新策略及新应用 | 第45-48页 |
| ·DNA家族改组 | 第46页 |
| ·部分基因片段改组 | 第46-47页 |
| ·单链DNA家族改组 | 第47页 |
| ·简并引物基因改组 | 第47页 |
| ·基因组改组 | 第47-48页 |
| ·其它DNA改组方法 | 第48页 |
| 2 基因的推理设计与改造—体外分子进化的捷径 | 第48-53页 |
| ·简单实用的遗传密码偏爱设计 | 第49-50页 |
| ·基于多个相关基因序列的推理设计 | 第50-51页 |
| ·关键功能区域的简并引物设计 | 第51-52页 |
| ·位点直接蛋白质重组 | 第52页 |
| ·功能蛋白质的设计 | 第52-53页 |
| 3 酶体外定向分子进化技术在环境生物污染治理中的应用 | 第53-58页 |
| ·有机磷农药的降解 | 第54页 |
| ·杀虫剂五氯苯酚的降解 | 第54-55页 |
| ·三氯丙烷降解 | 第55-56页 |
| ·三氯乙烯的降解 | 第56-57页 |
| ·联苯类芳香族复合物的降解 | 第57-58页 |
| 4 基因体外定向分子进化技术在农业中应用的研究进展 | 第58-62页 |
| ·转基因作物中除草剂抗性基因的改造 | 第59-60页 |
| ·扩大植物抗虫谱和提高抗虫能力 | 第60页 |
| ·植物抗病保护方面应用 | 第60-62页 |
| 下篇 研究论文 | 第62-143页 |
| 第四章 基于PCR的长DNA序列合成体系的建立 | 第62-118页 |
| 1 材料和方法 | 第63-64页 |
| ·实验材料,化学试剂和菌株 | 第63页 |
| ·基因设计 | 第63-64页 |
| ·引物设计 | 第64页 |
| ·引物纯化 | 第64页 |
| ·克隆与序列分析 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-113页 |
| ·设计vip3A、pulA和Tm-gus基因 | 第64-68页 |
| ·vip3AI基因的合成策略以及引物合成 | 第68-113页 |
| 3 讨论 | 第113-118页 |
| 第七章 耐高温β-葡萄糖苷酸酶在转基因拟南芥中的表达特性研究 | 第118-128页 |
| 1 材料与方法 | 第119-121页 |
| ·实验材料 | 第119页 |
| ·植物材料 | 第119页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第119页 |
| ·化学试剂和酶制剂 | 第119页 |
| ·培养基 | 第119页 |
| ·实验方法 | 第119-121页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第119-120页 |
| ·拟南芥转化 | 第120-121页 |
| ·拟南芥的培养 | 第120页 |
| ·农杆菌的准备 | 第120页 |
| ·拟南芥蘸花法转化 | 第120-121页 |
| ·拟南芥种子的筛选 | 第121页 |
| ·GUS组织化学染色分析 | 第121页 |
| 2 结果与分析 | 第121-126页 |
| ·农杆菌转化双元载体pYG8557和pYG8555的构建 | 第121-122页 |
| ·pYG8557和pYG8555转化拟南芥获得转基因植株 | 第122-125页 |
| ·改组定向进化的耐高温GUS基因在拟南芥中的功能分析 | 第125-126页 |
| 3 讨论 | 第126-128页 |
| 第八章 苹果EPSPS基因的克隆及其体外分子进化研究 | 第128-143页 |
| 1 材料和方法 | 第129-132页 |
| ·植物材料 | 第129页 |
| ·生化试剂和菌株 | 第129-130页 |
| ·引物合成和序列测定 | 第130-131页 |
| ·RACE获得全长cDNA序列 | 第131页 |
| ·生物信息学分析 | 第131页 |
| ·DNA改组,建库和筛选 | 第131-132页 |
| 2 结果与分析 | 第132-141页 |
| ·苹果cDNA RACE文库的构建 | 第132页 |
| ·PCR的方法获苹果mdepsps基因的保守片段 | 第132页 |
| ·通过RACE方法获得mdepsps全长cDNA序列 | 第132-135页 |
| ·MdEPSPS同源性分析 | 第135-139页 |
| ·mdepsps基因的定点突变和改组 | 第139-140页 |
| ·改组突变体库的建立和筛选 | 第140-141页 |
| 3 讨论 | 第141-143页 |
| 全文讨论 | 第143-146页 |
| 全文结论 | 第146-147页 |
| 本文创新点 | 第147-148页 |
| 参考文献 | 第148-166页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第166-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
