| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| ·虎皮病的研究进展 | 第16-17页 |
| ·α-法尼烯的合成途径及α-法尼烯合成酶研究进展 | 第17-19页 |
| ·RNAi 的研究进展 | 第19-21页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第19-20页 |
| ·RNAi 的应用 | 第20-21页 |
| ·苹果再生体系及转基因的研究进展 | 第21-25页 |
| ·苹果离体再生的研究进展 | 第22-23页 |
| ·基因型差异 | 第22页 |
| ·培养条件差异 | 第22-23页 |
| ·苹果转基因的研究进展 | 第23-25页 |
| ·外植体 | 第24页 |
| ·选择标记基因 | 第24页 |
| ·导入的外源基因 | 第24-25页 |
| ·研究目的意义及前景展望 | 第25-27页 |
| ·研究目的意义 | 第25-26页 |
| ·前景展望 | 第26-27页 |
| 第一部分 基因克隆及转α-法尼烯合成酶的基因烟草研究 | 第27-58页 |
| 1 材料与方法 | 第27-48页 |
| ·植物材料 | 第27-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·酶及生化试剂 | 第27页 |
| ·PCR 引物 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-48页 |
| ·RNA 的提取方法 | 第28-29页 |
| ·RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·配制药品 | 第29页 |
| ·RNA 电泳 | 第29-30页 |
| ·药品配制 | 第29-30页 |
| ·凝胶的制备 | 第30页 |
| ·RNA 反转录 | 第30-31页 |
| ·苹果α-法尼烯合成酶基因扩增 | 第31-34页 |
| ·PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第32-33页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第33-34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-39页 |
| ·碱法大量提取质粒DNA | 第34-36页 |
| ·正义表达载体构建 | 第36页 |
| ·RNAi 表达载体构建 | 第36-39页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备及转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第40页 |
| ·转基因烟草的PCR 检测 | 第40-42页 |
| ·CTAB 法微量法提取基因组DNA | 第40-41页 |
| ·转基因植株的PCR 筛选 | 第41页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第41-42页 |
| ·RNA 反转录 | 第42页 |
| ·PCR 检测 | 第42页 |
| ·转基因烟草的western 检测 | 第42-48页 |
| ·原核表达载体构建 | 第42-44页 |
| ·AFS 编码区基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·表达载体构建 | 第43页 |
| ·AFS 原核表达的诱导 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第43-44页 |
| ·抗体的制备 | 第44-45页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第45页 |
| ·Western 杂交 | 第45-48页 |
| 2. 结果与分析 | 第48-56页 |
| ·苹果AFS 基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·苹果果皮RNA 的提取及反转录 | 第48页 |
| ·AFS 基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·RNAi 表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·PBI 质粒载体的酶切 | 第49页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第49-50页 |
| ·Ri 目的片段的获得 | 第50页 |
| ·重组质粒的酶切回收和PBI—AFS 阳性重组质粒酶切 | 第50-51页 |
| ·AFS 基因正义表达载体的构建及烟草转化研究 | 第51-56页 |
| ·正义表达载体PBI-AFS 的构建 | 第51页 |
| ·表达载体pBI-AFS 的PCR 及酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第52-56页 |
| ·转基因烟草的PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·AFS 基因原核表达载体的构建及烟草的表达 | 第53-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| ·AFS 基因在蛋白水平中的表达分析 | 第56-57页 |
| ·苹果双链RNAi 载体研究 | 第57页 |
| ·进一步研究的设想 | 第57-58页 |
| 4. 结论 | 第58页 |
| 第二部分 苹果再生体系 | 第58-64页 |
| 1 材料和方法 | 第58-59页 |
| ·植物材料 | 第58页 |
| ·无菌苗体系的建立 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·叶片接种培养 | 第59页 |
| ·培养条件 | 第59页 |
| ·结果处理 | 第59页 |
| 2 结果分析 | 第59-63页 |
| ·基本培养基对叶片再生的影响 | 第59-60页 |
| ·糖的种类和浓度对叶片再生芽的影响 | 第60页 |
| ·叶片不同接种方向对再生的影响 | 第60-61页 |
| ·培养基中激素对叶片再生的影响 | 第61-62页 |
| ·不定芽的增殖及生根 | 第62-63页 |
| ·增殖 | 第62-63页 |
| ·生根 | 第63页 |
| ·移栽 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| ４结论 | 第64页 |
| 第三部分 苹果的遗传转化 | 第64-71页 |
| 1 材料与方法 | 第64-65页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·植物材料 | 第64页 |
| ·基因、农杆菌株系及培养基 | 第64-65页 |
| ·抗生素 | 第65页 |
| ·方法 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·Kan 对苹果叶片再生的影响 | 第65-66页 |
| ·抗菌素浓度对再生的影响. | 第66-67页 |
| ·AS 对转化效率的影响 | 第67-68页 |
| ·其他因素对转化的影响 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| ·遗传转化因素分析 | 第69页 |
| ·选择压的确定 | 第69页 |
| ·AS 在遗传转化中的作用 | 第69-70页 |
| 4 结论 | 第70-71页 |
| ·农杆菌介导的苹果遗传转化 | 第70页 |
| ·根癌农杆菌介导的AFS 基因转化苹果法 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-83页 |
| 附录:常用缓冲液及培养基的配制 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 论文发表情况 | 第87页 |
