| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| ·白介素-15研究进展 | 第10-17页 |
| ·IL-15的发现及其结构 | 第10页 |
| ·IL-15的来源 | 第10页 |
| ·IL-15的结构及基因表达调控 | 第10-12页 |
| ·IL-15R的特性 | 第12-13页 |
| ·IL-15的生物学作用 | 第13-17页 |
| ·结语和展望 | 第17页 |
| ·实验的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 实验材料 | 第18-23页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·试验动物 | 第18页 |
| ·菌株、载体 | 第18-19页 |
| ·主要药品与试剂 | 第19页 |
| ·IL-15引物 | 第19-20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-23页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第20页 |
| ·小量质粒提取所用溶液 | 第20页 |
| ·细胞培养用液 | 第20-21页 |
| ·CaCl_2法转化用材料 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE所用溶液的配制 | 第21页 |
| ·包涵体提取用溶液 | 第21-22页 |
| ·免疫印迹相关试剂 | 第22-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-32页 |
| ·淋巴细胞的分离与培养 | 第23页 |
| ·淋巴细胞总RNA的提取 | 第23页 |
| ·猪白细胞介素15基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·猪白细胞介素15基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·猪IL-15基因序列测定及生物信息学分析 | 第26页 |
| ·序列测定 | 第26页 |
| ·猪IL-15基因多序列比对 | 第26页 |
| ·猪IL-15与IL-2基因的分子系统进化分析 | 第26页 |
| ·猪IL-15基因密码子偏爱性分析 | 第26页 |
| ·猪IL-15基因推导氨基酸序列分析 | 第26页 |
| ·pET-32a(+)-mpIL-15表达菌株的构建 | 第26-27页 |
| ·猪IL-15成熟肽基因的扩增、克隆与鉴定 | 第26页 |
| ·质粒的提取、酶切与回收 | 第26-27页 |
| ·酶切回收的IL-15成熟肽cDNA与PET-32(a)+片段的连接 | 第27页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5_α、BL21(DE3)的制备 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·重组菌的小量诱导表达 | 第27-28页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定 | 第28页 |
| ·融合蛋白的Western Blot分析 | 第28-29页 |
| ·IPTG诱导的重组表达菌的转录检测 | 第29页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·关于IPTG浓度的优化 | 第29页 |
| ·关于诱导时间的优化 | 第29-30页 |
| ·重组表达蛋白在宿主菌中的分布 | 第30页 |
| ·重组融合蛋白的初步纯化 | 第30页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第30页 |
| ·重组蛋白的浓度的测定 | 第30-31页 |
| ·猪IL-15生物学活性检测 | 第31-32页 |
| 4 结果 | 第32-45页 |
| ·猪IL-15基因的扩增、克隆与鉴定 | 第32页 |
| ·猪IL-15基因的序列测定 | 第32-33页 |
| ·猪IL-15基因的生物信息学分析 | 第33-38页 |
| ·多序列比对结果 | 第33页 |
| ·猪IL-15基因氨基酸序列分析 | 第33页 |
| ·分子系统进化分析 | 第33-34页 |
| ·密码子偏向性分析 | 第34-38页 |
| ·重组表达载体pET-32(+)mpIL-15的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组菌的小量诱导表达 | 第39-40页 |
| ·重组表达蛋白在宿主菌中的分布 | 第40页 |
| ·重组表达菌的转录检测 | 第40页 |
| ·表达产物的Western Blot分析 | 第40-41页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第41-42页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第41-42页 |
| ·诱导时间的优化 | 第42页 |
| ·包涵体纯化 | 第42页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
| ·猪IL-15生物活性的检测 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-50页 |
| ·pIL-15基因的克隆及生物信息学分析 | 第45-46页 |
| ·pIL-15成熟肽的诱导表达 | 第46-48页 |
| ·pIL-15融合蛋白的纯化与活性测定 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
