| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-24页 |
| ·内切纤维素酶简介 | 第10-20页 |
| ·内切纤维素酶的来源 | 第10-11页 |
| ·内切纤维素酶的分子结构与功能 | 第11-13页 |
| ·内切纤维素酶的纯化与酶学性质 | 第13-16页 |
| ·内切纤维素酶的基因克隆 | 第16-19页 |
| ·内切纤维素酶的应用 | 第19-20页 |
| ·内切纤维素酶的研究概况 | 第20-21页 |
| ·国外研究概况 | 第20-21页 |
| ·国内研究概况 | 第21页 |
| ·cDNA克隆策略 | 第21-22页 |
| ·研究背景思路及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验设备及材料 | 第24-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌种及载体 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂与母液配制 | 第25-27页 |
| ·酶类 | 第27页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·其它 | 第27-28页 |
| 第三章 实验方法 | 第28-44页 |
| ·蚯蚓品种鉴定 | 第28页 |
| ·蚯蚓内切纤维素酶粗酶液的制备 | 第28-29页 |
| ·内切纤维素酶的酶活测定(DNS法) | 第29-30页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第30-31页 |
| ·内切纤维素酶粗酶的酶学性质 | 第31-32页 |
| ·粗酶的最适温度和最适pH | 第31页 |
| ·粗酶的热稳定性和pH稳定性 | 第31-32页 |
| ·内切纤维素酶的分离和纯化 | 第32-34页 |
| ·DEAE Sepharos fast Flow阴离子交换层析 | 第32-33页 |
| ·SephadexG-75凝胶过滤层析 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳纯度鉴定及酶分子量的测定 | 第34-35页 |
| ·酶谱法(ZymograpHy) | 第35页 |
| ·内切纤维素纯化酶的酶学性质 | 第35-36页 |
| ·酶动力学参数确定 | 第35页 |
| ·酶的最适温度和最适pH | 第35-36页 |
| ·酶的热稳定性和pH稳定性 | 第36页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第36页 |
| ·蚯蚓总RNA提取方法的优化改进 | 第36-38页 |
| ·RT-PCR | 第38-44页 |
| ·简并引物设计 | 第38页 |
| ·RT-PCR步骤 | 第38-40页 |
| ·切胶回收 PCR产物 | 第40-41页 |
| ·TA克隆 | 第41-43页 |
| ·测序 | 第43-44页 |
| 第四章 实验结果 | 第44-59页 |
| ·酶活测定 | 第44-45页 |
| ·内切纤维素酶的分离和纯化 | 第45-47页 |
| ·阴离子交换层析实验初始pH的确定 | 第45页 |
| ·DEAE Sepharos Fast Flow阴离子交换层析 | 第45-46页 |
| ·SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳纯度鉴定及酶分子量的测定 | 第47-48页 |
| ·酶谱定位内切纤维素酶 | 第48-49页 |
| ·酶反应动力学 | 第49页 |
| ·酶学性质 | 第49-52页 |
| ·粗酶的最适温度和最适pH | 第49-51页 |
| ·粗酶液的热稳定性与pH稳定性 | 第51页 |
| ·纯酶的最适温度和最适pH | 第51页 |
| ·纯酶的热稳定性和pH稳定性 | 第51-52页 |
| ·金属离子对酶活影响 | 第52-53页 |
| ·蚯蚓总RNA提取方法的优化改进 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR | 第54-59页 |
| ·RT-PCR产物图 | 第54-55页 |
| ·C1双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·RT-PCR产物的测序结果 | 第56-57页 |
| ·序列 C1的blastx结果 | 第57-59页 |
| 第五章 讨论 | 第59-63页 |
| 小结与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
