| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 文献综述 | 第10-27页 |
| 第一章 永生化细胞的研究进展 | 第10-19页 |
| ·关于细胞的衰老、危机和永生化 | 第10-12页 |
| ·衰老 | 第10-11页 |
| ·复制性衰老 | 第10-11页 |
| ·氧化损伤 | 第11页 |
| ·原癌基因激活 | 第11页 |
| ·危机 | 第11页 |
| ·永生化 | 第11-12页 |
| ·促使细胞永生化的方法 | 第12-15页 |
| ·病毒 | 第12-14页 |
| ·SV40 | 第12页 |
| ·EB 病毒 | 第12-13页 |
| ·人乳头瘤病毒 | 第13页 |
| ·其他病毒 | 第13-14页 |
| ·放射性因素 | 第14页 |
| ·P53 突变体 | 第14页 |
| ·癌基因、原癌基因 | 第14-15页 |
| ·端粒酶 | 第15页 |
| ·基因转染 | 第15页 |
| ·永生化的分子学机制 | 第15-17页 |
| ·P53 基因和P53 蛋白 | 第16页 |
| ·PRB | 第16-17页 |
| ·永生化细胞的检测方法 | 第17-18页 |
| ·检测外源基因在细胞中的整合及表达情况 | 第17页 |
| ·端粒酶活性的检测 | 第17页 |
| ·永生化细胞表面抗原的检测 | 第17-18页 |
| ·永生化细胞功能的检测 | 第18页 |
| ·已建成的永生化细胞系 | 第18-19页 |
| 第二章 端粒酶结构与功能的研究进展 | 第19-27页 |
| ·端粒与端粒酶 | 第19-20页 |
| ·端粒的结构功能及其遗传动力学 | 第20-21页 |
| ·端粒酶的结构与功能 | 第21-25页 |
| ·端粒酶的 RNA 组分(TR ) | 第22页 |
| ·端粒酶相关蛋白 | 第22-23页 |
| ·端粒酶的催化亚单位 | 第23-25页 |
| ·端粒酶催化亚单位的基因结构 | 第23页 |
| ·端粒酶催化亚单位的功能 | 第23-25页 |
| ·端粒酶催化亚单位的激活 | 第25页 |
| ·无端粒酶活性的永生化细胞的端粒维持 | 第25页 |
| ·端粒和端粒酶与细胞永生化的关系 | 第25-27页 |
| 试验研究 | 第27-42页 |
| 第三章 HTERT 质粒的提取纯化及鉴定 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·质粒PCINEO-HTERT | 第27页 |
| ·大肠杆菌DH5Α | 第27页 |
| ·限制性内切酶ECORI, SAL I | 第27页 |
| ·DNA MARKER | 第27页 |
| ·0.1MOL/L CACL2 溶液 | 第27页 |
| ·TE（PH8.0） | 第27-28页 |
| ·LB 培养基 | 第28页 |
| ·LB 平板（含氨苄青霉素） | 第28页 |
| ·50×TAE 溶液（贮存液） | 第28页 |
| ·1000×氨苄青霉素 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA 的转化、扩增和纯化 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·细菌转化 | 第29页 |
| ·质粒提取和纯化 | 第29页 |
| ·质粒定量和酶切鉴定 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-30页 |
| ·质粒扩增和酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第四章 转入端粒酶逆转录酶基因使猪脐静脉血管内皮细胞永生化的初步研究 | 第32-42页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·新鲜猪脐带 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·血清 | 第32页 |
| ·下丘脑粗提物 | 第32页 |
| ·肝素 | 第32-33页 |
| ·3%谷氨酰胺 | 第33页 |
| ·抗生素 | 第33页 |
| ·缓冲液 | 第33页 |
| ·PBS 液 | 第33页 |
| ·D-Hank’s 液 | 第33页 |
| ·消化液 | 第33-34页 |
| ·胶原酶 | 第33页 |
| ·ATV（Antibiotic trypsin versen）使用液 | 第33-34页 |
| ·脂质体Lipofect AMINE 2000 Reagent 转染试剂盒(Invitrogen) | 第34页 |
| ·G418 | 第34页 |
| ·端粒酶活性检测试剂盒 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·细胞培养 | 第34-35页 |
| ·培养液的准备 | 第34-35页 |
| ·猪脐静脉血管内皮细胞的分离 | 第35页 |
| ·脐静脉血管内皮细胞的原代培养 | 第35页 |
| ·血管内皮细胞的传代培养 | 第35页 |
| ·基因转染和细胞克隆的筛选 | 第35-36页 |
| ·基因转染 | 第35-36页 |
| ·细胞克隆和筛选 | 第36页 |
| ·端粒酶活性的检测 | 第36页 |
| ·细胞生长曲线 | 第36页 |
| ·F-ⅧAG 和CD34 检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-39页 |
| ·基因转染和细胞培养 | 第37-38页 |
| ·形态学观察 | 第38页 |
| ·转染后细胞形态 | 第38页 |
| ·端粒酶活性 | 第38页 |
| ·生长曲线 | 第38-39页 |
| ·Ⅷ因子和CD34 检测 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 缩略词 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 个人简介 | 第51页 |
