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日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的筛选及其抗原表位的初步鉴定研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-9页
缩略词表第9-10页
目录第10-13页
第一部分 文献综述第13-25页
 1 流行性日本乙型脑炎病毒的研究进展第13-18页
   ·日本乙型脑炎的病原特征第13-14页
   ·日本乙型脑炎病毒的主要抗原蛋白第14-15页
     ·结构蛋白第14页
     ·非结构蛋白第14-15页
   ·日本乙型脑炎病毒的流行特征第15页
   ·诊断技术及疫苗研究进展第15-18页
     ·乙脑病毒的诊断第15-16页
     ·乙脑病毒的疫苗研究第16-18页
 2 单抗克隆抗体的研究进展第18-20页
   ·单克隆抗体在乙脑病毒研究中的应用第19-20页
     ·在诊断中的应用第19页
     ·疾病治疗中的应用第19-20页
   ·乙脑病毒单克隆抗体在应用中存在的问题第20页
 3 抗原表位的研究进展第20-24页
   ·抗原表位的研究方法第21-22页
   ·单克隆抗体在抗原表位研究中的应用第22-24页
 本研究目的和意义第24-25页
第二部分 试验研究第25-54页
 第一章 日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的筛选第25-37页
  1 材料第25页
   ·细菌、质粒与细胞第25页
   ·主要试剂及配制第25页
   ·主要仪器设备第25页
  2 试验方法第25-31页
   ·乙脑病毒E基因的克隆表达第25-29页
     ·E基因的引物设计第25-26页
     ·E基因的扩增第26页
     ·E基因的TA克隆第26页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第26-27页
     ·连接产物的转化第27页
     ·质粒DNA的提取第27页
     ·E基因TA克隆质粒的鉴定第27-28页
     ·pET-28a(+)载体与TA阳性克隆质粒的酶切第28页
     ·E基因与pET-28a(+)表达载体的连接第28-29页
     ·连接产物的转化与重组质粒pET28a(+)-E的鉴定第29页
   ·乙脑病毒E蛋白的表达第29页
   ·E蛋白的纯化与复性第29-30页
   ·日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体筛选与鉴定第30-31页
     ·E蛋白包被浓度的选择第30页
     ·间接ELISA鉴定第30-31页
  3 试验结果第31-35页
   ·乙脑病毒E基因PCR扩增第31页
   ·TA克隆质粒pMD19T-E的PCR和酶切鉴定第31-32页
   ·原核表达载体pET28a(+)-E的PCR和酶切鉴定第32-33页
   ·乙脑病毒E蛋白的SDS-PAGE鉴定第33-34页
   ·乙脑病毒E蛋白的纯化第34页
   ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定第34-35页
     ·乙脑病毒E蛋白最佳包被浓度的确定第34页
     ·E蛋白单克隆抗体的筛选第34-35页
  4 讨论第35-37页
   ·乙脑病毒E蛋白的表达第35页
   ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体的筛选第35-37页
 第二章 乙脑病毒E蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定研究第37-54页
  1 材料第37页
   ·质粒、菌株第37页
   ·主要试剂及配制第37页
   ·主要仪器设备第37页
  2 试验方法第37-44页
   ·日本乙型脑炎病毒E基因上主要抗原表位的引物设计第37-38页
   ·原核表达载体PRSET(a)-egfp的构建第38-40页
     ·绿色荧光蛋白基因的PCR扩增第38-39页
     ·绿色荧光蛋白基因的TA克隆第39页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第39页
     ·连接产物的转化第39页
     ·pMD19T-egfp质粒的提取第39页
     ·pMD19T-egfp质粒的PCR、酶切及测序鉴定第39-40页
     ·pMD19T-egfp与PRSET(a)的双酶切第40页
     ·PRSET(a)-egfp连接产物的转化与鉴定第40页
   ·乙脑病毒抗原表位基因的原核表达载体构建第40-42页
     ·乙脑病毒E基因上抗原表位基因的PCR扩增第40-41页
     ·乙脑病毒E基因上抗原表位的TA克隆第41页
     ·抗原表位基因与原核表达载体PRSET(a)-egfp的连接第41页
     ·乙脑病毒抗原表位原核表达载体PRSET(a)-egfp-e的鉴定第41-42页
   ·抗原表位蛋白的表达第42页
   ·抗原表位蛋白的纯化与复性第42-43页
   ·单克隆抗体识别乙脑病毒E蛋白上抗原表位的初步鉴定第43-44页
     ·间接ELISA方法的建立第43页
     ·单克隆抗体识别抗原表位的ELISA鉴定第43-44页
  3 试验结果第44-52页
   ·乙脑病毒E基因上的主要抗原表位第44-45页
   ·EGFP基因的PCR扩增结果第45页
   ·乙脑病毒E基因上抗原表位基因的PCR扩增结果第45-46页
   ·PRSET(a)-egfp原核表达载体鉴定结果第46页
   ·PRSET(a)-egfp-e原核表达载体鉴定结果第46-47页
   ·PRSET(a)-egfp-e原核表达载体的基因测序第47页
   ·PRSET(a)-egfp-e的原核表达结果第47-48页
   ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体识别抗原表位的鉴定第48-52页
     ·抗原表位蛋白的最佳包被浓度第48-49页
     ·E蛋白单克隆抗体识别其上抗原表位蛋白的ELISA鉴定结果第49-52页
  4 讨论第52-54页
三 结论第54-55页
参考文献第55-62页
致谢第62-63页
附件材料第63-65页

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