| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 流行性日本乙型脑炎病毒的研究进展 | 第13-18页 |
| ·日本乙型脑炎的病原特征 | 第13-14页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的主要抗原蛋白 | 第14-15页 |
| ·结构蛋白 | 第14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14-15页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的流行特征 | 第15页 |
| ·诊断技术及疫苗研究进展 | 第15-18页 |
| ·乙脑病毒的诊断 | 第15-16页 |
| ·乙脑病毒的疫苗研究 | 第16-18页 |
| 2 单抗克隆抗体的研究进展 | 第18-20页 |
| ·单克隆抗体在乙脑病毒研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·在诊断中的应用 | 第19页 |
| ·疾病治疗中的应用 | 第19-20页 |
| ·乙脑病毒单克隆抗体在应用中存在的问题 | 第20页 |
| 3 抗原表位的研究进展 | 第20-24页 |
| ·抗原表位的研究方法 | 第21-22页 |
| ·单克隆抗体在抗原表位研究中的应用 | 第22-24页 |
| 本研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二部分 试验研究 | 第25-54页 |
| 第一章 日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的筛选 | 第25-37页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·细菌、质粒与细胞 | 第25页 |
| ·主要试剂及配制 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-31页 |
| ·乙脑病毒E基因的克隆表达 | 第25-29页 |
| ·E基因的引物设计 | 第25-26页 |
| ·E基因的扩增 | 第26页 |
| ·E基因的TA克隆 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27页 |
| ·E基因TA克隆质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·pET-28a(+)载体与TA阳性克隆质粒的酶切 | 第28页 |
| ·E基因与pET-28a(+)表达载体的连接 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化与重组质粒pET28a(+)-E的鉴定 | 第29页 |
| ·乙脑病毒E蛋白的表达 | 第29页 |
| ·E蛋白的纯化与复性 | 第29-30页 |
| ·日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·E蛋白包被浓度的选择 | 第30页 |
| ·间接ELISA鉴定 | 第30-31页 |
| 3 试验结果 | 第31-35页 |
| ·乙脑病毒E基因PCR扩增 | 第31页 |
| ·TA克隆质粒pMD19T-E的PCR和酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·原核表达载体pET28a(+)-E的PCR和酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·乙脑病毒E蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| ·乙脑病毒E蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·乙脑病毒E蛋白最佳包被浓度的确定 | 第34页 |
| ·E蛋白单克隆抗体的筛选 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| ·乙脑病毒E蛋白的表达 | 第35页 |
| ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体的筛选 | 第35-37页 |
| 第二章 乙脑病毒E蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定研究 | 第37-54页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·质粒、菌株 | 第37页 |
| ·主要试剂及配制 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-44页 |
| ·日本乙型脑炎病毒E基因上主要抗原表位的引物设计 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体PRSET(a)-egfp的构建 | 第38-40页 |
| ·绿色荧光蛋白基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·绿色荧光蛋白基因的TA克隆 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·pMD19T-egfp质粒的提取 | 第39页 |
| ·pMD19T-egfp质粒的PCR、酶切及测序鉴定 | 第39-40页 |
| ·pMD19T-egfp与PRSET(a)的双酶切 | 第40页 |
| ·PRSET(a)-egfp连接产物的转化与鉴定 | 第40页 |
| ·乙脑病毒抗原表位基因的原核表达载体构建 | 第40-42页 |
| ·乙脑病毒E基因上抗原表位基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·乙脑病毒E基因上抗原表位的TA克隆 | 第41页 |
| ·抗原表位基因与原核表达载体PRSET(a)-egfp的连接 | 第41页 |
| ·乙脑病毒抗原表位原核表达载体PRSET(a)-egfp-e的鉴定 | 第41-42页 |
| ·抗原表位蛋白的表达 | 第42页 |
| ·抗原表位蛋白的纯化与复性 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体识别乙脑病毒E蛋白上抗原表位的初步鉴定 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第43页 |
| ·单克隆抗体识别抗原表位的ELISA鉴定 | 第43-44页 |
| 3 试验结果 | 第44-52页 |
| ·乙脑病毒E基因上的主要抗原表位 | 第44-45页 |
| ·EGFP基因的PCR扩增结果 | 第45页 |
| ·乙脑病毒E基因上抗原表位基因的PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| ·PRSET(a)-egfp原核表达载体鉴定结果 | 第46页 |
| ·PRSET(a)-egfp-e原核表达载体鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·PRSET(a)-egfp-e原核表达载体的基因测序 | 第47页 |
| ·PRSET(a)-egfp-e的原核表达结果 | 第47-48页 |
| ·乙脑病毒E蛋白单克隆抗体识别抗原表位的鉴定 | 第48-52页 |
| ·抗原表位蛋白的最佳包被浓度 | 第48-49页 |
| ·E蛋白单克隆抗体识别其上抗原表位蛋白的ELISA鉴定结果 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 三 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附件材料 | 第63-65页 |
