| 内容提要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 序言 | 第9-37页 |
| 1 脂肪酶的研究概况 | 第9-18页 |
| ·脂肪酶的化学修饰 | 第9-13页 |
| ·活性中心的定向修饰 | 第10页 |
| ·改善脂肪酶催化功能的修饰 | 第10-12页 |
| ·化学修饰反应条件的影响 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的固定化 | 第13-15页 |
| ·吸附法 | 第13-14页 |
| ·交联法 | 第14页 |
| ·包埋法 | 第14页 |
| ·共价结合法 | 第14-15页 |
| ·基因手段在脂肪酶研究中的应用 | 第15-18页 |
| ·脂肪酶基因的克隆与表达 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的蛋白质工程 | 第16-18页 |
| 2 脂肪酶的催化性质 | 第18-24页 |
| ·脂肪酶的催化特性 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第19-20页 |
| ·非水相中脂肪酶的催化反应 | 第20-22页 |
| ·几种脂肪酶酶活的测定方法 | 第22-24页 |
| ·NaOH滴定法 | 第22-23页 |
| ·分光光度测定法 | 第23页 |
| ·脂肪酶活性快速评估法 | 第23-24页 |
| ·灿烂绿检测法 | 第23页 |
| ·橄榄油乳化液平板法 | 第23-24页 |
| 3 脂肪酶的分离纯化及酶学特性 | 第24-27页 |
| 4 脂肪酶的结晶与高级结构 | 第27-28页 |
| 5 脂肪酶的生产与应用 | 第28-36页 |
| ·脂肪酶的生产和商业化 | 第28-33页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第33-36页 |
| ·在食品工业中的应用 | 第33页 |
| ·在洗涤剂工业中的应用 | 第33-34页 |
| ·制备化工产品及试剂的应用 | 第34-35页 |
| ·在手性化合物及生物活性物质的合成中的应用 | 第35页 |
| ·在皮革、皮毛与绢纺等脱脂工艺中的应用 | 第35-36页 |
| ·其他应用 | 第36页 |
| 6 展望 | 第36页 |
| 7 本研究的意义 | 第36-37页 |
| 第一部分 碱性脂肪酶的表征研究 | 第37-82页 |
| 1 材料与方法 | 第37-51页 |
| ·嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定 | 第37-41页 |
| ·菌种与培养基 | 第38页 |
| ·主要试剂与仪器设备 | 第38页 |
| ·实验方法与步骤 | 第38-41页 |
| ·碱性脂肪酶的大量收集与表征研究 | 第41-50页 |
| ·脂肪酶来源 | 第42页 |
| ·主要试剂与仪器设备 | 第42-43页 |
| ·碱性脂肪酶的纯化及分子量 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE与PAGE | 第42页 |
| ·碱性脂肪酶活力测定(硝基苯棕榈酸为底物) | 第42页 |
| ·碱性脂肪酶等电点与双向电泳及SDS-PAGE变性/复性研究 | 第42-43页 |
| ·质谱分析 | 第43页 |
| ·糖基化研究 | 第43页 |
| ·酶学特性研究 | 第43页 |
| ·实验方法与步骤 | 第43-50页 |
| ·碱性脂肪酶的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·酶粉收集 | 第44页 |
| ·分子量测定 | 第44页 |
| ·等电点测定 | 第44-45页 |
| ·双向电泳 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE变性/复性研究 | 第46-47页 |
| ·质谱分析 | 第47页 |
| ·糖基化研究 | 第47-49页 |
| ·酶学特性 | 第49-50页 |
| ·碱性脂肪酶功能基团的研究 | 第50页 |
| ·方要试剂与仪器设备 | 第50页 |
| ·实验方法与步骤 | 第50页 |
| ·碱性脂肪酶热稳定性研究 | 第50-51页 |
| ·方要试剂与仪器设 | 第50-51页 |
| ·实验方法与步骤 | 第51页 |
| ·羧酸钠对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第51页 |
| ·单糖对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第51页 |
| ·双糖对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第51页 |
| ·多元醇对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第51页 |
| 2 结果与讨论 | 第51-80页 |
| ·嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定 | 第51-55页 |
| ·SephacrylS-200柱层析 | 第51-52页 |
| ·嗜硫色谱柱层析 | 第52页 |
| ·脂肪酶活力与蛋白浓度测定 | 第52-53页 |
| ·脂肪酶纯度的鉴定 | 第53页 |
| ·脂肪酶的CLC脱盐 | 第53-54页 |
| ·脂肪酶N端氨基酸序列测定 | 第54页 |
| ·嗜硫色谱 | 第54-55页 |
| ·方法学上的改进 | 第55页 |
| ·灿烂绿快速检测法 | 第55页 |
| ·嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶 | 第55页 |
| ·碱性脂肪酶的大量收集与表征研究 | 第55-71页 |
| ·碱性脂肪酶的纯化 | 第55-57页 |
| ·离子交换层析中缓冲液pH值的确定 | 第55页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow | 第55-56页 |
| ·嗜硫色谱柱层析 | 第56-57页 |
| ·脂肪酶的SDS-PAGE及PAGE纯度鉴定 | 第57页 |
| ·碱性脂肪酶分子量计算 | 第57-59页 |
| ·等电点测定 | 第59-60页 |
| ·双向电泳 | 第60页 |
| ·质谱分析 | 第60-62页 |
| ·SDS-PAGE变性/复性研究 | 第62-63页 |
| ·糖基化研究 | 第63-65页 |
| ·糖染色 | 第63页 |
| ·苯酚-硫酸法 | 第63-64页 |
| ·脂肪酶N-糖基化分析 | 第64-65页 |
| ·酶学特性 | 第65-71页 |
| ·酶催化最适作用条件 | 第65-66页 |
| ·稳定性研究 | 第66-67页 |
| ·低浓度金属离子对酶活力的影响 | 第67-68页 |
| ·米氏常数的测定 | 第68-71页 |
| ·橄榄油为底物时的K_m | 第69-70页 |
| ·对硝基苯棕榈酸为底物时的K_m | 第70-71页 |
| ·碱性脂肪酶功能基团的研究 | 第71-77页 |
| ·半胱氨酸巯基的化学修饰 | 第71-72页 |
| ·丝氨酸的化学修饰 | 第72-73页 |
| ·酪氨酸酚羟基的化学修饰 | 第73-74页 |
| ·精氨酸胍基的化学修饰 | 第74页 |
| ·色氨酸吲哚基的化学修饰 | 第74-75页 |
| ·赖氨酸ε-氨基的化学修饰 | 第75页 |
| ·组氨酸咪唑基的化学修饰 | 第75-76页 |
| ·二硫键的化学修饰 | 第76-77页 |
| ·蛋氨酸硫醚基的化学修饰 | 第77页 |
| ·碱性脂肪酶热稳定性研究 | 第77-80页 |
| ·羧酸钠对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第78页 |
| ·单糖对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第78-79页 |
| ·双糖对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第79页 |
| ·多元醇对碱性脂肪酶热稳定性的影响 | 第79-80页 |
| ·方法学的改进 | 第80页 |
| 3 总结 | 第80-81页 |
| 4 展望 | 第81-82页 |
| 第二部分 碱性脂肪酶结晶的初步研究 | 第82-88页 |
| 1 结晶概述 | 第82-84页 |
| ·微量结晶的基本原理 | 第82页 |
| ·影响结晶的因素 | 第82-83页 |
| ·蛋白质结晶 | 第83页 |
| ·脂肪酶结晶研究现状 | 第83-84页 |
| 2 材料与仪器 | 第84页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第84页 |
| ·碱性脂肪酶预处理 | 第84页 |
| ·晶体培养 | 第84页 |
| ·结果观测 | 第84页 |
| 4 结果与讨论 | 第84-88页 |
| ·温度与蛋白浓度 | 第84页 |
| ·结晶条件的探索 | 第84-85页 |
| ·结晶条件的设计 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 英文缩略词中英文对照表 | 第96-97页 |
| 录附 结晶试剂组成 | 第97-102页 |
| 摘要 | 第102-104页 |
| 个人简历 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |