| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-27页 |
| ·植物抗寒的生理、生化机制 | 第8-10页 |
| ·抗寒机理研究 | 第8-10页 |
| ·抗寒类型 | 第8页 |
| ·抗冷机理 | 第8-9页 |
| ·抗冻机理假说 | 第9-10页 |
| ·生物膜的结构组成与植物抗寒性关系 | 第10-14页 |
| ·低温胁迫对细胞膜的影响 | 第10-12页 |
| ·低温对脂膜组成的影响 | 第10-11页 |
| ·低温对膜磷脂组分的影响 | 第11-12页 |
| ·低温胁迫对膜蛋白的影响 | 第12页 |
| ·细胞膜与植物抗寒性的关系 | 第12-14页 |
| ·脂肪酸的组成和植物抗寒性的关系 | 第12-13页 |
| ·磷脂的组成和植物抗寒性的关系 | 第13-14页 |
| ·抗寒基因工程研究进展 | 第14-25页 |
| ·导入抗寒调控基因的研究 | 第15-16页 |
| ·导入转录因子CBF3基因 | 第15-16页 |
| ·导入抗寒功能基因的研究 | 第16-20页 |
| ·导入抗渗透胁迫COR基因 | 第16-18页 |
| ·导入AFP蛋白基因的研究 | 第18-20页 |
| ·抗冻蛋白的理化性质 | 第18页 |
| ·抗冻蛋白在植物抗寒中的作用机制 | 第18-20页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶基因的表达调控与植物的耐寒性 | 第20-25页 |
| ·拟南芥fad突变体揭示脂肪酸脱饱和酶在植物抗寒中的功能 | 第20-21页 |
| ·导入脂肪酸脱饱和代谢关键酶基因的研究 | 第21-25页 |
| ·导入甘油-3-磷酸酰基转移酶 | 第21页 |
| ·导入植物脂酰-脂脱饱和酶 | 第21-23页 |
| ·导入ω3脂肪酸脱饱和酶 | 第23-25页 |
| ·研究目的与意义 | 第25-26页 |
| ·研究路线 | 第26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-40页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-40页 |
| ·载体的构建方法 | 第28-37页 |
| ·小量提取质粒 | 第28-29页 |
| ·大量提取质粒 | 第29-30页 |
| ·聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第31页 |
| ·胶回收方法 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌的转化方法 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌的感受态制备方法 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态的检测和转化方法 | 第32-33页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第33页 |
| ·拟南芥种子消毒 | 第33页 |
| ·拟南芥的人工培养 | 第33页 |
| ·拟南芥总RNA的提取方法 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-37页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR的反应 | 第35-37页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·PCR反应 | 第35-37页 |
| ·目的片段克隆 | 第37页 |
| ·目的片段测序 | 第37页 |
| ·植物表达载体35S-pGreenⅡ0029-ω3构建 | 第37页 |
| ·三亲交配转化农杆菌GV3103方法 | 第37-40页 |
| ·农杆菌介导转化拟南芥和热研5号柱花草 | 第38-40页 |
| ·农杆菌介导ω3基因真空抽滤法转化拟南芥 | 第38页 |
| ·农杆菌介导ω3脂肪酸脱饱和酶基因转化热研5号柱花草 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·目的基因的分离和克隆 | 第40页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第40页 |
| ·RT-PCR | 第40-46页 |
| ·目的基因的分离 | 第40-41页 |
| ·ω3基因的分离 | 第40-41页 |
| ·CBF3基因的分离 | 第41页 |
| ·AtGoLS3基因的分离 | 第41页 |
| ·CBF3基因的分禽 | 第41页 |
| ·AtGoLS3基因的分离 | 第41-42页 |
| ·目的基因的克隆及测序 | 第42-46页 |
| ·ω3克隆到T载体以及序列测定 | 第42-43页 |
| ·CBF3克隆到T载体以及序列测定 | 第43-45页 |
| ·AtGoLS3 克隆到T载体以及序列测定 | 第45-46页 |
| ·35S-pGreen II 0029-ω3植物表达载体的构建方案 | 第46-48页 |
| ·pJIT30-ω3载体的构建和鉴定 | 第47页 |
| 3·3·2 35S-pGreen II 0029-ω3植物表达载体的构建和鉴定 | 第47-48页 |
| ·ω3脂肪酸去饱和酶基因的遗传转化 | 第48-50页 |
| ·拟南芥的转化植株的获得 | 第48-49页 |
| ·拟南芥的真空抽滤法转化 | 第48页 |
| ·拟南芥转化植株的筛选 | 第48-49页 |
| ·热研5号柱花草的转化结果 | 第49-50页 |
| 4讨论 | 第50-53页 |
| ·耐寒相关基因克隆 | 第50页 |
| ·遗传转化的讨论 | 第50-52页 |
| ·后续工作的进行 | 第52-53页 |
| 5结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
