| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-61页 |
| 第一章 羟基脂肪酸聚酯研究进展 | 第16-38页 |
| 第一节 PHAs简介 | 第16-20页 |
| 第二节 PHAs在自然寄主中的生物合成、解聚及其分子机制 | 第20-26页 |
| 第三节 PHAs的应用 | 第26-28页 |
| 第四节 PHAs的生产 | 第28-34页 |
| 第五节 利用转基因植物生产PHAs遇到的问题和今后的发展方向 | 第34-38页 |
| 第二章 叶绿体基因工程研究进展 | 第38-61页 |
| 第一节 叶绿体基因组研究概况 | 第38-42页 |
| 第二节 叶绿体基因工程简介 | 第42-49页 |
| 第三节 叶绿体基因工程的应用 | 第49-57页 |
| 第四节 叶绿体基因工程存在的问题与解决策略 | 第57-59页 |
| 第五节 叶绿体基因工程的前景展望 | 第59-61页 |
| 第二部分 通过叶绿体基因工程在烟草中合成中长链羟基脂肪酸聚酯 | 第61-109页 |
| 第一章 前言 | 第62-64页 |
| 第二章 材料与方法 | 第64-87页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第64-65页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| 2 试验方法 | 第65-87页 |
| ·植物叶绿体DNA的提取 | 第65-66页 |
| ·叶绿体基因启动子、终止子和同源片段的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·DNA片段的回收(按V-gene DNA凝胶回收试剂盒说明书进行) | 第67-68页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态 | 第68-69页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第69页 |
| ·质粒 DNA的提取 | 第69-70页 |
| ·质粒 DNA的酶切验证 | 第70页 |
| ·DNA测序 | 第70-72页 |
| ·叶绿体转化表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第73-74页 |
| ·PEG法纯化质粒DNA | 第74-75页 |
| ·基因枪法转化烟草叶片 | 第75-77页 |
| ·CTAB法提取烟草基因组总DNA | 第77-78页 |
| ·叶绿体型转基因植株的 PCR检测 | 第78-79页 |
| ·转基因烟草的Southern blot检测 | 第79-83页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第83-85页 |
| ·外源基因在转基因烟草中的遗传分析 | 第85页 |
| ·气相色谱法检测转基因烟草中的mcl-PHAs | 第85-86页 |
| ·透射电镜观察mcl-PHAs颗粒在叶绿体中的积累 | 第86-87页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第87-108页 |
| 1 结果 | 第87-103页 |
| ·叶绿体表达载体的构建和鉴定 | 第87-92页 |
| ·基因枪转化及转基因烟草的获得 | 第92-93页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第93-94页 |
| ·转基因烟草的Southern blot分析 | 第94-95页 |
| ·外源基因在叶绿体基因组中的整合及同质化程度鉴定 | 第95-98页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR分析 | 第98-99页 |
| ·外源基因在叶绿体型转基因烟草中遵循母性遗传规律 | 第99-100页 |
| ·转基因烟草中的mcl-PHAs含量分析 | 第100-102页 |
| ·透射电镜观察转基因植株叶片叶绿体中的mcl-PHAs颗粒 | 第102-103页 |
| 2 讨论 | 第103-108页 |
| ·利用脂肪酸β-氧化的中间产物在转基因烟草叶绿体中合成mcl-PHAs | 第103-104页 |
| ·利用植物脂肪酸生物合成途径的中间产物合成mcl-PHAs | 第104-105页 |
| ·mcl-PHAs的积累对烟草叶绿体结构的影响 | 第105-106页 |
| ·转基因烟草中合成的mcl-PHAs单体组成 | 第106页 |
| ·PHAs的合成和积累对转基因烟草生长发育的影响 | 第106页 |
| ·关于叶绿体基因工程 | 第106-108页 |
| 小结 | 第108-109页 |
| 第三部分 甘薯叶绿体表达载体的构建及PHAC/GFP融合基因在甘薯和烟草叶绿体中的瞬间表达 | 第109-131页 |
| 第一章 前言 | 第110-112页 |
| 第二章 材料和方法 | 第112-115页 |
| 1 材料 | 第112页 |
| ·植物材料 | 第112页 |
| ·菌种和质粒 | 第112页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第112页 |
| ·主要仪器 | 第112页 |
| 2 方法 | 第112-115页 |
| ·植物叶绿体 DNA的提取 | 第112页 |
| ·甘薯叶绿体同源片段的克隆 | 第112-113页 |
| ·扩增片段的克隆及酶切图谱分析 | 第113页 |
| ·甘薯叶绿体表达载体的构建和酶切验证 | 第113页 |
| ·质粒 DNA的大量提取和纯化 | 第113页 |
| ·基因枪法转化甘薯和烟草叶片 | 第113-114页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第114-115页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第115-130页 |
| 1 结果 | 第115-127页 |
| ·两段甘薯叶绿体DNA片段的扩增 | 第115-116页 |
| ·两段甘薯叶绿体DNA片段的序列分析 | 第116-119页 |
| ·甘薯叶绿体同源片段的酶切图谱 | 第119页 |
| ·甘薯叶绿体rbcL与accD基因间序列的扩增与分析 | 第119-121页 |
| ·甘薯叶绿体定点整合表达载体的构建 | 第121-124页 |
| ·基因枪法转化植物叶绿体 | 第124-125页 |
| ·PHAs合酶/GFP融合蛋白在叶绿体中的瞬间表达 | 第125-127页 |
| 2 讨论 | 第127-130页 |
| ·开展甘薯叶绿体基因工程 | 第127页 |
| ·叶绿体转化机理的探索 | 第127-128页 |
| ·GFP报告基因可以应用于叶绿体基因工程 | 第128-130页 |
| 小结 | 第130-131页 |
| 全文讨论 | 第131-132页 |
| 全文结论 | 第132-133页 |
| 本研究的创新点 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-147页 |
| 附录 | 第147-157页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第157-158页 |
| 致谢 | 第158页 |
