| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-16页 |
| 实验材料 | 第16-24页 |
| 1 试剂 | 第16-18页 |
| ·分子生物学试剂 | 第16页 |
| ·免疫和蛋白分离纯化试剂 | 第16-17页 |
| ·核酸荧光染料 | 第17-18页 |
| ·细胞培养和转染试剂 | 第18页 |
| 2 设计引物 | 第18-19页 |
| 3 合成肽 | 第19页 |
| 4 质粒载体 | 第19页 |
| 5 菌株和细胞株 | 第19-22页 |
| 6 疟原虫虫株 | 第22页 |
| 7 疟原虫病人血清样品 | 第22页 |
| 8 实验动物 | 第22页 |
| 9 主要仪器设备 | 第22-24页 |
| 实验方法 | 第24-54页 |
| 1 常用的分子生物学方法 | 第24-26页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24页 |
| ·DNA片段的琼脂糖凝胶电泳回收 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·DNA转化感受态细菌 | 第26页 |
| 2 RNA制备和RT-PCR | 第26-28页 |
| ·Trizol Reagent分离总RNA | 第26-27页 |
| ·RNA的DNase I消化 | 第27页 |
| ·采用SUPERSCRIPT预扩增系统进行逆转录PCR | 第27页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第27-28页 |
| ·靶cDNA的扩增 | 第28页 |
| 3 Western Blot | 第28-33页 |
| ·Laemmli凝胶电泳法 | 第28-30页 |
| ·在Tris-Tricine缓冲系统中电泳 | 第30-31页 |
| ·用转移槽转移蛋白 | 第31-32页 |
| ·免疫印迹 | 第32-33页 |
| 4 细胞生物学操作 | 第33-35页 |
| ·细胞培养 | 第33页 |
| ·细胞复苏 | 第33-34页 |
| ·细胞的镜下观察 | 第34页 |
| ·贴壁细胞的胰蛋白酶消化和传代 | 第34页 |
| ·细胞计数 | 第34页 |
| ·细胞冻存 | 第34-35页 |
| 5 Lipofectinamine介导真核细胞瞬时转染 | 第35页 |
| 6 重组蛋白的提取、纯化和切割 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白样品准备 | 第35页 |
| ·过柱前试剂准备 | 第35-36页 |
| ·样品过柱纯化步骤 | 第36页 |
| ·肠肽酶(Enterkinase)切割His融合蛋白 | 第36页 |
| 7 蛋白质浓度的检测 | 第36-37页 |
| ·紫外吸收法检测蛋白浓度 | 第36-37页 |
| ·考马思亮蓝法测蛋白质浓度 | 第37页 |
| 8 多肽合成 | 第37页 |
| ·固相链组装 | 第37页 |
| ·肽树脂的裂解和侧链保护基的脱除 | 第37页 |
| 9 表位基因DNA人工合成 | 第37-41页 |
| ·表位DNA序列设计遵守的原则 | 第37-38页 |
| ·聚合酶链式反应合成表位基因序列 | 第38页 |
| ·DNA聚丙烯酰胺凝胶酸电泳 | 第38-41页 |
| ·乙醇沉淀浓缩PCR产物 | 第41页 |
| ·表位基因克隆至质粒载体 | 第41页 |
| 10 多表位基因的随机重组 | 第41-42页 |
| ·双表位基因随机串联的构建 | 第41页 |
| ·随机串联不同长度大小的多表位基因 | 第41-42页 |
| 11 多表位基因重组表达文库的构建 | 第42-43页 |
| ·分别含Kozak序列和终止密码子真核表达载体的构建 | 第42页 |
| ·不同长度片段的多抗原表位基因表达文库构建 | 第42页 |
| ·基因重组文库中基因多态性分析 | 第42-43页 |
| 12 多克隆抗血清的制备和纯化 | 第43-45页 |
| ·免疫小鼠产生多克隆抗血清 | 第43页 |
| ·免疫兔产生多克隆抗血清 | 第43-44页 |
| ·从兔抗血清中纯化IgG | 第44-45页 |
| 13 高免疫原性抗原基因的筛选 | 第45-47页 |
| ·抗血清的处理 | 第46页 |
| ·诱导转印 | 第46页 |
| ·非特异封闭 | 第46-47页 |
| ·抗原抗体结合检测 | 第47页 |
| 14 免疫共沉淀 | 第47-48页 |
| 15 酶联免疫吸附测定 | 第48-49页 |
| 16 免疫荧光染色和流式细胞仪分析 | 第49页 |
| 17 间接免疫荧光分析 | 第49-50页 |
| ·与恶性疟原虫(P.falciparum)天然蛋白的识别 | 第49页 |
| ·与约氏疟原虫(P.yoelii)天然蛋白的交叉识别 | 第49-50页 |
| 18 免疫透射电镜 | 第50页 |
| 19 在鼠疟动物模型中的研究 | 第50-51页 |
| ·小鼠体内对P.yoelii攻击试验 | 第50页 |
| ·体外小鼠巨噬细胞对裂殖子吞噬能力的测定 | 第50-51页 |
| 20 恶性疟原虫的体外培养 | 第51-52页 |
| ·溶液配方 | 第51页 |
| ·细胞复苏步骤 | 第51页 |
| ·细胞换液 | 第51-52页 |
| ·细胞的冻存 | 第52页 |
| ·恶性疟原虫同步化培养 | 第52页 |
| 21 兔抗血清IgG对恶性疟原虫的作用 | 第52-54页 |
| ·对恶性疟原虫的体外生长抑制 | 第52页 |
| ·对恶性疟原虫的裂殖子入侵阻断试验 | 第52-54页 |
| 实验结果 | 第54-108页 |
| 第一部分：多表位基因随机重组抗原库的构建及其免疫原性 | 第54-72页 |
| 1 单表位基因的选择、设计和克隆 | 第55-56页 |
| 2 多表位基因的随机组装 | 第56-61页 |
| 3 多表位基因真核表达文库的构建 | 第61-64页 |
| 4 多表位基因抗原库的免疫原性 | 第64-72页 |
| 第二部分：高免疫原性多表位基因疫苗的筛选和鉴定 | 第72-94页 |
| 1 多表位随机重组基因文库相应原核表达文库的构建 | 第73-75页 |
| 2 高免疫原性多表位基因疫苗的筛选和鉴定 | 第75-82页 |
| 3 不同多表位基因结构与免疫原性关系的分析 | 第82-84页 |
| 4 高免疫原性多表位基因ES312、ES391和ES452疫苗的在鼠疟动物模型中的交叉保护效果 | 第84页 |
| 5 高免疫原性多表位基因疫苗体的恶性疟原虫体外检测 | 第84-94页 |
| 第三部分：小鼠体内T淋巴细胞封闭对抵抗疟原虫生长的特异效应 | 第94-102页 |
| 第四部分：疟原虫血率的细胞流式分选相对定量分析 | 第102-108页 |
| 讨论 | 第108-123页 |
| 结论 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 文献综述一：多表位疫苗研究进展 | 第131-138页 |
| 文献综述二：DNA疫苗设计和优化策略 | 第138-146页 |
| 文献综述三：基因人工进化的分子育种技术 | 第146-162页 |
| 附录Ⅰ：博士生期间发表的文章和参加的会议 | 第162-164页 |
| 附录Ⅱ：国际专利申请表 | 第164-165页 |
| 附录Ⅲ：常用数据汇集 | 第165页 |
