| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩写 | 第7-11页 |
| 1 绪论 | 第11-33页 |
| ·重要的蒽环类抗生素--柔红霉素和阿霉素简介 | 第11-14页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的分子结构 | 第11-12页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的作用机制 | 第12-13页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的工业生产方法 | 第13-14页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的生物合成 | 第14-21页 |
| ·生物合成途径的研究方法 | 第14-15页 |
| ·生物合成途径 | 第15-18页 |
| ·生物合成基因及其分子生物学研究 | 第18-21页 |
| ·链霉菌基因表达系统 | 第21-27页 |
| ·变铅青链霉菌作为基因工程宿主菌的优点 | 第21页 |
| ·链霉菌基因克隆的载体系统 | 第21-23页 |
| ·链霉菌基因的启动子 | 第23-24页 |
| ·链霉菌基因的转录终止子 | 第24页 |
| ·链霉菌基因的密码子偏向性和SD序列 | 第24-25页 |
| ·影响链霉菌基因表达的其它因素 | 第25-26页 |
| ·异源基因在链霉菌中的表达 | 第26-27页 |
| ·微生物转化 | 第27-31页 |
| ·微生物转化的特点 | 第27-28页 |
| ·微生物转化的应用 | 第28-29页 |
| ·微生物转化技术的研究前沿 | 第29-31页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第31-33页 |
| 2 doxA基因的克隆 | 第33-54页 |
| ·实验材料 | 第34-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-42页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第38页 |
| ·柔红霉素产生菌的发酵培养和产物分析 | 第38-39页 |
| ·链霉菌基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·Southern杂交 | 第39-40页 |
| ·PCR反应 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌质粒转化(CaCl_2法) | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒分离 | 第41页 |
| ·DNA片段的回收 | 第41-42页 |
| ·DNA序列的测定 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-51页 |
| ·不同柔红霉素产生菌的平板培养和发酵产抗实验 | 第42-44页 |
| ·不同柔红霉素产生菌基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·不同来源的柔红霉素产生菌基因组DNA的Southern杂交分析 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增doxA基因 | 第46-48页 |
| ·doxA基因的亚克隆和测序 | 第48-51页 |
| ·doxA基因的同源性分析 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·总结 | 第52-54页 |
| 3 链霉菌表达质粒的构建和doxA基因的表达 | 第54-78页 |
| ·实验材料 | 第54-59页 |
| ·菌种和质粒 | 第54-56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第56-58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器和设备 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-63页 |
| ·链霉菌原生质体制备 | 第59页 |
| ·链霉菌质粒转化 | 第59页 |
| ·链霉菌质粒提取 | 第59-60页 |
| ·BamHI部分酶切实验条件的确定 | 第60-61页 |
| ·变铅青链霉菌的培养和菌丝体破碎 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第61-63页 |
| ·实验结果 | 第63-74页 |
| ·波赛链霉菌ATCC 29050来源的doxA基因表达质粒构建 | 第63-65页 |
| ·链霉菌表达载体质粒的构建 | 第65页 |
| ·天蓝淡红链霉菌SIPI 1482来源doxA基因表达质粒的构建 | 第65-71页 |
| ·PCR扩增表达质粒中的doxA基因 | 第71页 |
| ·波赛链霉菌ATCC 29050来源doxA基因在变铅青链霉菌中的表达 | 第71-74页 |
| ·天蓝淡红链霉菌SIPI 1482来源doxA基因在变铅青链霉菌中的表达 | 第74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·总结 | 第76-78页 |
| 4 doxA基因工程菌对柔红霉素的转化作用 | 第78-95页 |
| ·实验材料 | 第79-80页 |
| ·培养基 | 第79页 |
| ·主要仪器和设备 | 第79-80页 |
| ·实验方法 | 第80-81页 |
| ·工程菌的直接发酵培养 | 第80页 |
| ·工程菌对柔红霉素和阿霉素的转化 | 第80页 |
| ·工程菌培养上清液对柔红霉素的转化 | 第80-81页 |
| ·TLC分析方法 | 第81页 |
| ·HPLC分析方法 | 第81页 |
| ·实验结果 | 第81-93页 |
| ·工程菌的直接发酵代谢产物分析 | 第81-82页 |
| ·工程菌对柔红霉素的转化作用 | 第82-85页 |
| ·工程菌对阿霉素的转化作用 | 第85-86页 |
| ·工程菌培养上清液对柔红霉素的转化作用 | 第86页 |
| ·工程菌TK24(pYG57)转化柔红霉素条件的初步优化 | 第86-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| ·总结 | 第94-95页 |
| 5 柔红霉素转化产物的分析 | 第95-100页 |
| ·实验材料 | 第95-96页 |
| ·柔红霉素转化抽提产物 | 第95页 |
| ·主要试剂和材料 | 第95页 |
| ·主要仪器和设备 | 第95-96页 |
| ·实验方法 | 第96页 |
| ·柔红霉素转化产物的分离纯化 | 第96页 |
| ·紫外可见吸收光谱分析 | 第96页 |
| ·柔红霉素转化产物的LS／MS分析条件 | 第96页 |
| ·实验结果 | 第96-98页 |
| ·转化产物的理化性质 | 第96页 |
| ·柔红霉素转化产物纯化后的紫外可见吸收光谱 | 第96-97页 |
| ·柔红霉素转化产物的LC／MS分析 | 第97页 |
| ·柔红霉素转化副产物的鉴定分析 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98页 |
| ·总结 | 第98-100页 |
| 6 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 附录 | 第108-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 综述报告和发表文章 | 第118页 |
