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近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)谷胱甘肽S转移酶和金属硫蛋白基因cDNA克隆及原核表达研究

中文摘要第1-4页
Abstract第4-9页
第一章 综述第9-15页
   ·GSTs 和 MT 的生物学性质第10-12页
     ·GSTs 和 MT 的分类第10-11页
     ·GSTs 和 MT 的分子结构第11-12页
   ·GSTs 和 MT 的生物学功能第12-13页
   ·GSTs 和 MT 的研究进展第13-14页
   ·研究的目的与意义第14-15页
第二章 近江牡蛎 GSTs 和 MT 的编码区 cDNA 克隆第15-31页
   ·实验材料、仪器及试剂第15-16页
     ·材料第15页
     ·仪器第15-16页
     ·试剂第16页
   ·实验方法第16-18页
     ·实验取样第16页
     ·实验用品的前处理第16-17页
     ·RNA 的提取第17页
     ·近江牡蛎 cDNA 的合成第17-18页
   ·近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 编码区 cDNA 克隆第18-24页
     ·引物设计第18页
     ·近江牡蛎 GST-μ编码区 cDNA 克隆第18-19页
     ·近江牡蛎 GST-σ编码区 cDNA 克隆第19页
     ·近江牡蛎 MT 编码区 cDNA 克隆第19-20页
     ·PCR 产物胶回收第20-21页
     ·胶回收产物加 A 步骤第21页
     ·加 A 产物与载体连接第21页
     ·感受态细胞 DH5α的制备及连接产物的转化第21-22页
     ·单菌落的阳性克隆检测第22-24页
   ·结果第24-29页
     ·RNA 提取第24页
     ·GST-μ编码区 cDNA 的克隆第24-25页
     ·GST-σ编码区 cDNA 的克隆第25页
     ·MT 编码区 cDNA 的克隆第25-26页
     ·GST-μ编码区 cDNA 及氨基酸序列比对分析第26-27页
     ·GST-σ编码区 cDNA 及氨基酸序列比对分析第27-28页
     ·MT 编码区 cDNA 及氨基酸序列比对分析第28-29页
   ·讨论第29-31页
     ·GST-μ和 GST-σ编码区 cDNA 基因克隆第29页
     ·MT 编码区 cDNA 基因克隆第29-31页
第三章 近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 的原核表达第31-55页
   ·实验材料、仪器及试剂第31-34页
     ·材料第31页
     ·仪器第31-32页
     ·试剂第32页
     ·主要试剂第32-34页
   ·实验方法第34-42页
     ·重组质粒 pQE30/GST-μ、pQE30/ GST-σ和 pGEX-4T-1/MT 的构建第34-38页
     ·pQE30/GST-μ、pQE30/ GST-σ和 pGEX-4T-1/MT 重组质粒在大肠杆菌 M15中的诱导表达第38-41页
     ·GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白在不同诱导温度下的表达第41页
     ·GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白在不同诱导时间下的表达第41页
     ·原核表达 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白可溶性第41-42页
     ·重组 GST-μ、GST-σ和 MT 蛋白 Western blotting第42页
   ·结果第42-52页
     ·原核表达载体 pQE30/GST-μ、pQE30/ GST-σ和 pGEX-4T-1/MT 的构建第42-44页
     ·近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白在大肠杆菌 M15 中的表达第44-45页
     ·近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白在不同诱导温度下的表达第45-47页
     ·近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白在不同诱导时间内的表达第47-49页
     ·GST-μ、GST-σ和 MT 蛋白原核表达的可溶性第49-50页
     ·Western blotting 分析 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白第50-52页
   ·讨论第52-55页
     ·表达载体和工程菌的选择第52-53页
     ·诱导温度对近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白表达的影响第53-54页
     ·诱导时间对近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白表达的影响第54页
     ·IPTG 浓度对近江牡蛎 GST-μ、GST-σ和 MT 重组蛋白表达的影响第54-55页
全文总结第55-56页
参考文献第56-64页
研究生期间发表论文清单第64-65页
致谢第65页

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