玉米2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶活性与耐旱性的关系
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 一 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 高等植物的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2C | 第10-17页 |
| ·蛋白可逆磷酸化在生物信号传递中的作用 | 第10-11页 |
| ·蛋白磷酸酶的分类 | 第11-12页 |
| ·PP2C的理化性质 | 第12页 |
| ·PP2C基因及其蛋白质结构特征 | 第12-14页 |
| ·PP2C在高等植物中的功能与作用 | 第14-17页 |
| ·PP2C参与脱落酸(ABA)信号途径 | 第14-15页 |
| ·PP2C参与ABA调控的种子休眠/萌发信号途径 | 第14-15页 |
| ·PP2C参与ABA调控的气孔关闭信号转导途径 | 第15页 |
| ·PP2C参与ABA调控的抗逆信号转导途径 | 第15页 |
| ·PP2C参与植物创伤信号途径 | 第15-16页 |
| ·PP2C参与植物的发育 | 第16页 |
| ·PP2C参与植物的抗病信号途径 | 第16-17页 |
| ·PP2C作为转录因子作用 | 第16页 |
| ·PP2C在植物细胞壁修饰中的作用 | 第16-17页 |
| 2 实时荧光定量PCR | 第17-22页 |
| ·实时荧光定量PCR原理 | 第17-18页 |
| ·定量理论 | 第18-19页 |
| ·理论模式 | 第18-19页 |
| ·绝对定量和相对定量 | 第19页 |
| ·实时荧光定量PCR常见方法 | 第19-21页 |
| ·荧光嵌合法(SYBR Green Ⅰ法) | 第19-20页 |
| ·荧光探针法 | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量PCR在植物研究中的应用 | 第21-22页 |
| 3.蛋白磷酸酶活性测定原理 | 第22-23页 |
| 4.本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 二 材料与方法 | 第25-33页 |
| 1 ZmPP2Cα基因mRNA表达量测定 | 第25-31页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·载体与菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第25页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第25-26页 |
| ·所用溶液及其配制 | 第26-27页 |
| ·RNA提取试剂的配制 | 第26页 |
| ·基因组DNA提取试剂的配制 | 第26页 |
| ·克隆试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·ZmPP2Cα基因在干旱胁迫下的表达特性 | 第27-31页 |
| ·材料培养与干旱处理 | 第27页 |
| ·玉米叶片总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第28页 |
| ·实时荧光定量PCR引物的特异性检测 | 第28-29页 |
| ·定量标准品的制备 | 第29页 |
| ·FQ-PCR反应及分析 | 第29-30页 |
| ·统计分析 | 第30-31页 |
| 2.ZmPP2C α酶活性测定 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·主要试剂,试剂盒及仪器 | 第31页 |
| ·所用溶液及其配制 | 第31页 |
| ·PP2C酶抽提buffer的配制 | 第31页 |
| ·反应buffer的配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·反应缓冲液各组分兼容性测定 | 第31页 |
| ·酶液提取 | 第31-32页 |
| ·酶活标准曲线制作 | 第32页 |
| ·酶活测定 | 第32-33页 |
| 三 结果与分析 | 第33-37页 |
| 1 ZmPP2Ca基因在干旱胁迫条件下的差异表达 | 第33-35页 |
| 2 酶活测定结果 | 第35-37页 |
| 四 讨论 | 第37-41页 |
| 1 材料的干旱处理 | 第37页 |
| 2 RNA的制备与检测 | 第37-38页 |
| 3 内参基因的选择 | 第38页 |
| 4 定量PCR实验中应该注意的几个问题 | 第38-39页 |
| 5 ZmPP2C α基因在干旱胁迫下的表达模式 | 第39-40页 |
| 6 PP2C酶活性与耐旱性的关系 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 附录1 分子生物学常用方法 | 第46-50页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第50页 |
