| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 脂联素(ADIPONECTIN)的研究进展 | 第10-15页 |
| ·脂联素概述 | 第11-12页 |
| ·脂联素的发现 | 第11页 |
| ·脂联素分子结构 | 第11-12页 |
| ·脂联素受体 | 第12页 |
| ·影响脂联素分泌的因素 | 第12页 |
| ·脂联素的生物学作用 | 第12-14页 |
| ·脂联素在家畜生产中的应用前景 | 第14-15页 |
| ·小结 | 第15页 |
| 2 巴斯德毕赤酵母的研究进展 | 第15-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第16-20页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第18-20页 |
| ·外源蛋白的高效表达 | 第20-23页 |
| ·外源基因的性质 | 第21-22页 |
| ·酵母的培养环境 | 第22-23页 |
| ·外源蛋白的稳定性 | 第23-25页 |
| 第二章 实验研究 | 第25-55页 |
| 实验一、猪脂联素基因克隆及序列分析 | 第25-37页 |
| 1 实验材料与方法 | 第25-33页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·脂肪组织 | 第25页 |
| ·克隆载体 | 第25页 |
| ·大肠杆菌 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·主要的酶和试剂 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·沙子岭猪脂联素基因克隆的技术路线 | 第27页 |
| ·逆转录PCR扩增目的基因 | 第27-30页 |
| ·克隆载体pMD-ADPN的构建与序列测定 | 第30-33页 |
| 2 实验结果 | 第33-36页 |
| ·总RNA提取结果 | 第33-34页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第34页 |
| ·重组克隆质粒pMD-ADPN鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序结果 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37页 |
| 实验二：猪重组脂联素在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定 | 第37-55页 |
| 1 实验材料与方法 | 第37-47页 |
| ·材料 | 第37-41页 |
| ·表达载体及菌株 | 第37页 |
| ·主要酶与试剂 | 第37-38页 |
| ·主要培养基和溶液的配置 | 第38-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-47页 |
| ·沙子岭猪脂联素基因真核表达的技术路线 | 第41页 |
| ·沙子岭猪脂联素基因酵母表达载体pPICZaA-ADPN的构建 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒pPICZαA-ADPN线性化 | 第42页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pPICZαA-ADPN转化 | 第43页 |
| ·重组酵母GS115-ADPN的筛选鉴定 | 第43-44页 |
| ·阳性重组酵母GS115-ADPN小规模诱导表达 | 第44-45页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第45-46页 |
| ·考马斯亮蓝法测定目的蛋白表达量 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-52页 |
| ·沙子岭猪脂联素基因酵母表达载体pPICZαA-ADPN的构建 | 第47-49页 |
| ·Mut表型的筛选 | 第49页 |
| ·阳性重组酵母GS115-ADPN的筛选 | 第49页 |
| ·沙子岭猪脂联素基因在酵母细胞中转录效果 | 第49-50页 |
| ·沙子岭猪脂联素的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的鉴定 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白含量的测定 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |