| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 鸭病毒性肝炎Ⅰ型研究概述 | 第12-20页 |
| ·DHV-1流行病学 | 第12-13页 |
| ·病原学 | 第13页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第13-14页 |
| ·Ⅰ型DHV增殖研究 | 第14-16页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒的基因组及功能蛋白结构分析 | 第16-18页 |
| ·编码区 | 第16-17页 |
| ·非编码区 | 第17-18页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒反向遗传学研究 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| 2 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 SV40 LT蛋白表达与抗体制备 | 第21-29页 |
| 1 材料和方法 | 第21-24页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌株质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·LT抗原基因的扩增 | 第22页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·SV40-LT蛋白诱导最佳条件确定与蛋白表达 | 第23页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第23页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第23页 |
| ·抗体鉴定 | 第23页 |
| ·抗体效价的检测 | 第23-24页 |
| 2 结果 | 第24-28页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第24页 |
| ·SV40-LT序列信号肽、亲水性、抗原指数和表面可及性分析 | 第24-25页 |
| ·LT抗原的优化表达 | 第25-26页 |
| ·重组LT抗原的纯化与鉴定 | 第26-27页 |
| ·SV40-LT多克隆抗体的检测 | 第27页 |
| ·抗体效价检测 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 DEF-LT细胞系构建与鉴定 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌种、质粒和DEF细胞 | 第29页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-33页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·重组质粒PMX-SV40构建 | 第30-31页 |
| ·构建表达SV40-LT基因的重组逆转录病毒 | 第31页 |
| ·最佳嘌呤霉素筛选浓度确定 | 第31页 |
| ·重组病毒感染DEF细胞 | 第31页 |
| ·细胞形态学鉴定DEF-LT细胞 | 第31-32页 |
| ·DEF-LT细胞mRNA和基因组插入水平检测 | 第32页 |
| ·DEF-LT细胞表达SV40-LT蛋白IFA检测 | 第32页 |
| ·DEF-LT细胞表达SV40-LT蛋白Western blot检测 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-36页 |
| ·SV40-LT基因PCR结果 | 第33页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第33页 |
| ·嘌呤霉素最佳工作浓度 | 第33-34页 |
| ·DEF-LT阳性克隆结果 | 第34-35页 |
| ·DEF-LT细胞PCR和RT-PCR鉴定 | 第35页 |
| ·DEF-LT间接免疫荧光鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·DEF-LT Western Bloting鉴定 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 DHV在DEF-LT细胞上增殖特点研究 | 第38-46页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·病毒、DEF细胞 | 第38页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·DHV-1感染DEF-LT细胞 | 第39页 |
| ·RT-PCR检测 | 第39页 |
| ·IFA检测 | 第39-40页 |
| ·Western blot检测 | 第40页 |
| ·SPF鸡胚感染试验 | 第40页 |
| ·一步生长曲线 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-44页 |
| ·显微镜观察 | 第41页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第41-42页 |
| ·IFA检测结果 | 第42页 |
| ·Western blot检测结果 | 第42-43页 |
| ·鸡胚感染试验结果 | 第43页 |
| ·DHV-1在DEF-LT细胞中的增殖规律 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
