| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| ·微生物利用木糖发酵乙醇的研究进展. | 第14-23页 |
| ·天然微生物利用木糖发酵生产乙醇的研究 | 第14-16页 |
| ·木糖的代谢途径 | 第16-17页 |
| ·工程菌株利用木糖发酵乙醇的研究 | 第17-23页 |
| ·运动发酵单胞菌抗逆研究进展 | 第23-24页 |
| ·微生物抗逆的全细胞调控机制 | 第24-25页 |
| ·RPOS 基因在大肠杆菌抗逆中的调控作用 | 第25页 |
| ·微生物对胁迫的反应机制 | 第25-27页 |
| ·细胞质膜流动性对乙醇胁迫的反应机制 | 第26页 |
| ·HSP 蛋白对乙醇胁迫的反应机制 | 第26-27页 |
| ·抗氧化酶对乙醇胁迫的反应机制 | 第27页 |
| ·海藻糖对乙醇胁迫的反应机制 | 第27页 |
| ·立题依据 | 第27-29页 |
| 第二章 运动发酵单胞菌工程菌木糖利用特性及逆境耐受研究 | 第29-59页 |
| 1. 材料与方法 | 第31-44页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·引物合成与测序 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-44页 |
| ·D.RADIODURANS DNA 的提取 | 第33页 |
| ·运动发酵单胞菌基因组的提取 | 第33-34页 |
| ·重叠延伸PCR 构建融合重组基因 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收(按照试剂盒QIAEX II 的说明书) | 第34-35页 |
| ·质粒提取（碱裂解法） | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备（氯化钙转化法）及热击转化DNA | 第35-36页 |
| ·电击转化感受态细胞制备（所有步骤均在冰浴条件下操作） | 第36页 |
| ·大肠杆菌电击转化 | 第36页 |
| ·运动发酵单胞菌电击转化 | 第36页 |
| ·运动发酵单胞菌胁迫冲击试验 | 第36-37页 |
| ·重组运动发酵单胞菌发酵及细胞生长量的测定 | 第37页 |
| ·糖、乙醇及其他次生代谢物质的测定 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第37-39页 |
| ·WESTERN BLOT 分析 | 第39-42页 |
| ·酶活测定 | 第42页 |
| ·实时荧光定量PCR(QRT-PCR)原理 | 第42-44页 |
| 2. 结果与分析 | 第44-56页 |
| ·木糖利用运动发酵单胞菌工程菌的构建 | 第44-49页 |
| ·启动子功能验证 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·重组运动发酵单胞菌利用木糖的生长情况 | 第46-47页 |
| ·重组运动发酵单胞菌利用木糖和葡萄糖发酵 | 第47-48页 |
| ·重组运动发酵单胞菌利用木糖和葡萄糖发酵中产生的次生代谢产物 | 第48页 |
| ·重组运动发酵单胞菌中木糖代谢的酶活测定 | 第48-49页 |
| ·IRRE 基因提高运动发酵单胞菌逆境耐受的研究分析 | 第49-56页 |
| ·IRRE 基因穿梭质粒的构建 | 第49-50页 |
| ·Z. MOBILIS (IRRE+)和 Z. MOBILIS 的生长曲线 | 第50页 |
| ·IRRE 基因在运动发酵单胞菌中的表达情况 | 第50-51页 |
| ·IRRE 基因对Z. MOBILIS 的保护作用 | 第51-52页 |
| ·IRRE 基因对运动发酵单胞菌乙醇产量的提高 | 第52-54页 |
| ·IRRE 基因对运动发酵单胞菌中产乙醇关键基因的保护 | 第54-55页 |
| ·IRRE 基因对运动发酵单胞菌中RPOE 基因的表达量的影响 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| ·木糖利用运动发酵单胞菌工程菌的构建分析. | 第56-57页 |
| ·IRRE 基因提高运动发酵单胞菌逆境耐受的分析 | 第57-59页 |
| 第三章 乙醇胁迫下大肠杆菌RPOS 调控基因的表达谱分析 | 第59-99页 |
| 1. 材料与方法 | 第60-71页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·酶及生化试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·引物合成与测序 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-71页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取（CTAB 法） | 第61-62页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收(按照试剂盒QIAEX II 的说明书) | 第62页 |
| ·质粒提取（碱裂解法） | 第62-63页 |
| ·感受态细胞的制备（氯化钙转化法）及热击转化DNA | 第63页 |
| ·电击转化感受态细胞制备（所有步骤均在冰浴条件下操作） | 第63-64页 |
| ·电击转化 | 第64页 |
| ·重叠延伸PCR 构建融合重组基因 | 第64页 |
| ·线性DNA QHCM的准备 | 第64-66页 |
| ·含有PKD46 的E. COLI BW25113 电击转化感受态细胞的制备 | 第66-67页 |
| ·线性DNA 的转化及突变株的筛选 | 第67页 |
| ·突变株的鉴定 | 第67-68页 |
| ·运动发酵单胞菌胁迫冲击试验 | 第68-69页 |
| ·基因表达谱研究 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量PCR(QRT-PCR)原理 | 第70页 |
| ·基因芯片数据分析网站及软件 | 第70-71页 |
| 2. 结果与分析 | 第71-95页 |
| ·同源臂Q500 和H500 的基因克隆及CM片段的克隆 | 第71页 |
| ·含抗性盒的线性片段的获得 | 第71-72页 |
| ·突变株的构建 | 第72页 |
| ·突变株的分子验证 | 第72-74页 |
| ·大肠杆菌培养时相的选择 | 第74-76页 |
| ·正常培养条件下E. COLI BW25113(RPOS)和E. COLI BW25113 的生长曲线 | 第74-75页 |
| ·胁迫条件下E. COLI BW25113(RPOS-)和E. COLI BW25113 的生长曲线 | 第75-76页 |
| ·芯片比较组数据散点图 | 第76页 |
| ·芯片结果分析 | 第76-94页 |
| ·1596乙醇冲击下条件下，RPOS 调控基因的表达谱概述 | 第76-78页 |
| ·基因调控因子的表达谱分析 | 第78-87页 |
| ·碳代谢相关基因表达情况 | 第87页 |
| ·氨基酸代谢中基因的表达情况 | 第87-91页 |
| ·无机离子运输及代谢相关基因的表达情况 | 第91页 |
| ·核酸转运及代谢相关基因的表达情况 | 第91-92页 |
| ·与转录相关的基因的表达情况 | 第92-93页 |
| ·与细胞膜防御及转运相关的基因的表达情况 | 第93页 |
| ·翻译后修饰相关基因的表达情况 | 第93-94页 |
| ·能量产生转化基因的表达情况 | 第94页 |
| ·功能未知基因的表达情况 | 第94页 |
| ·荧光实时定量对芯片结果的初步验证 | 第94-95页 |
| 3. 讨论 | 第95-99页 |
| 第四章 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 个人简历 | 第111页 |
