| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| ·禽流感病毒的研究 | 第11-15页 |
| ·禽流感病毒的命名及分类 | 第11页 |
| ·禽流感的危害 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒的形态结构及分子致病机制 | 第12-14页 |
| ·禽流感的诊断 | 第14-15页 |
| ·实时荧光PCR技术 | 第15-21页 |
| ·实时荧光PCR原理 | 第16页 |
| ·实时荧光PCR检测方法 | 第16-20页 |
| ·实时荧光PCR在生物检测上的应用 | 第20-21页 |
| ·Armored RNA技术 | 第21-27页 |
| ·大肠杆菌MS2噬菌体的分子调控机制 | 第22-24页 |
| ·Armored RNA技术的建立 | 第24-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-50页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·常用溶液的配制 | 第28-30页 |
| ·引物和荧光探针的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-50页 |
| ·表达载体pET32a-CP-HAC(简称HACP1)的构建 | 第31-37页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs)的原核表达和双酶消化实验 | 第37页 |
| ·病毒样颗粒的的初步纯化和RT-PCR检测 | 第37-39页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs)的纯化及其形态观察和稳定性检测 | 第39-40页 |
| ·病毒样颗粒产量的优化 | 第40-47页 |
| ·H5亚型禽流感病毒阳性对照标准曲线的建立 | 第47-50页 |
| 第三章 结果与分析 | 第50-70页 |
| ·表达载体pET32a-CP-HAC(简称pHACP1)的构建 | 第50-52页 |
| ·病毒样颗粒的鉴定 | 第52-56页 |
| ·表达产物的单双酶消化鉴定 | 第52-53页 |
| ·病毒样颗粒的RT-PCR结果 | 第53-54页 |
| ·病毒样颗粒的电镜观察结果 | 第54-55页 |
| ·病毒样颗粒的稳定性检测 | 第55-56页 |
| ·病毒样颗粒产量的优化 | 第56-64页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第56-59页 |
| ·分子调控水平的优化 | 第59-64页 |
| ·H5亚型禽流感阳性对照标准曲线的建立 | 第64-70页 |
| ·与靶序列的变温杂交反应 | 第64-65页 |
| ·以pHACP1质粒为H5亚型禽流感病毒阳性对照标准曲线的建立 | 第65-66页 |
| ·均匀设计法对一步法反转录实时荧光PCR检测病毒样颗粒RNA体系的优化 | 第66-69页 |
| ·以pHACP1病毒样颗粒为H5亚型禽流感阳性标准品标准曲线的建立 | 第69-70页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第70-76页 |
| ·病毒样颗粒作为H5亚型禽流感病毒阳性质控品的研究 | 第70-72页 |
| ·病毒样颗粒的产量优化研究 | 第72-74页 |
| ·H5亚型禽流感病毒阳性对照的建立 | 第74-76页 |
| 小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
