| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-26页 |
| 1 蜜蜂白垩病研究进展 | 第13-18页 |
| ·病原及其病原生物学特性的研究 | 第13-14页 |
| ·病原培养条件的研究 | 第14-15页 |
| ·防治方面的研究 | 第15-18页 |
| ·科学的饲养管理 | 第15-16页 |
| ·药物防治 | 第16-17页 |
| ·蜜蜂抗病育种的研究 | 第17-18页 |
| 2 胞外蛋白酶的研究 | 第18-25页 |
| ·蛋白酶的种类 | 第19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶为致病的决定因子 | 第19页 |
| ·蛋白酶活性测定的研究 | 第19-20页 |
| ·分离纯化技术的研究概况 | 第20-25页 |
| ·粗分离法 | 第20页 |
| ·沉淀法 | 第20-21页 |
| ·透析 | 第21页 |
| ·液相色谱 | 第21页 |
| ·超滤 | 第21-22页 |
| ·离子交换层析 | 第22-23页 |
| ·疏水层析 | 第23页 |
| ·亲和层析 | 第23-24页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第24-25页 |
| 3 本试验的研究背景及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶的纯化 | 第26-50页 |
| 1 试验材料 | 第26-30页 |
| ·试验菌株 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·试剂和溶液 | 第26-29页 |
| ·筛选分泌胞外酶菌株所用试剂 | 第26-27页 |
| ·蛋白酶活性测定所用试剂 | 第27页 |
| ·蛋白质含量测定所用试剂 | 第27页 |
| ·离子交换层析缓冲液 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 电泳试剂 | 第27-29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-40页 |
| ·分泌胞外酶菌株的筛选 | 第30页 |
| ·蜜蜂球囊菌的培养 | 第30-31页 |
| ·马铃薯酵母培养基的制备 | 第30页 |
| ·倒平板 | 第30页 |
| ·接菌 | 第30页 |
| ·液体培养基的制备 | 第30-31页 |
| ·液体培养 | 第31页 |
| ·粗酶液的准备 | 第31页 |
| ·胞外产物蛋白质含量测定 | 第31-32页 |
| ·实验原理 | 第31-32页 |
| ·蛋白质含量的测定方法 | 第32页 |
| ·蛋白酶活性检测 | 第32-33页 |
| ·蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶产量与时间的关系 | 第33页 |
| ·正交实验选择(NH_4)_2SO_4沉淀法的处理条件 | 第33-34页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第34页 |
| ·DEAE-Sapharose Fast Flow 离子交换层析 | 第34-36页 |
| ·预处理 | 第34页 |
| ·装柱 | 第34-35页 |
| ·平衡 | 第35页 |
| ·上样与洗脱 | 第35页 |
| ·再生与清洗 | 第35-36页 |
| ·Sephadex G-75 凝胶过滤层析 | 第36-38页 |
| ·Sephadex G-75 凝胶预处理 | 第36页 |
| ·装柱 | 第36-37页 |
| ·平衡 | 第37页 |
| ·上样与洗脱 | 第37-38页 |
| ·再生与清洗 | 第38页 |
| ·SDS 聚丙烯酞胺凝胶电泳及相对分子量测定 | 第38-40页 |
| ·装板 | 第38页 |
| ·灌注分离胶 | 第38-39页 |
| ·灌注浓缩胶 | 第39页 |
| ·安装电泳装置上样 | 第39页 |
| ·电泳 | 第39页 |
| ·凝胶的染色 | 第39页 |
| ·凝胶的脱色 | 第39页 |
| ·凝胶成像 | 第39-40页 |
| ·计算分子量 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-47页 |
| ·菌株产酶情况的观察 | 第40-41页 |
| ·牛血清白蛋白浓度标准曲线 | 第41页 |
| ·蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活力与时间的关系 | 第41-42页 |
| ·正交试验结果方差分析表 | 第42-43页 |
| ·离子交换层析结果 | 第43-45页 |
| ·离子交换层析样品的制备 | 第43-44页 |
| ·离子交换层析 | 第44-45页 |
| ·凝胶过滤层析结果 | 第45页 |
| ·分子量测定 | 第45-46页 |
| ·蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶纯化结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 理化性质的研究 | 第50-60页 |
| 1 试验材料 | 第50-51页 |
| ·原料 | 第50页 |
| ·试验试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器和设备 | 第50-51页 |
| 2 试验方法 | 第51-53页 |
| ·温度对酶活性影响 | 第51页 |
| ·最适温度 | 第51页 |
| ·热稳定性 | 第51页 |
| ·pH 对酶活力影响 | 第51-52页 |
| ·最适pH 值测定 | 第51-52页 |
| ·pH 稳定性 | 第52页 |
| ·金属离子对酶活力影响 | 第52-53页 |
| ·抑制剂对酶活力影响 | 第53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-57页 |
| ·温度对酶活性影响 | 第53-55页 |
| ·最适温度 | 第53-54页 |
| ·酶的热稳定性 | 第54-55页 |
| ·pH 对酶活性影响 | 第55-56页 |
| ·pH 对酶的影响 | 第55页 |
| ·酶对不同pH 的耐受性 | 第55-56页 |
| ·金属离子对酶活力影响 | 第56-57页 |
| ·抑制剂对酶活力影响 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |