| 致谢 | 第1-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-39页 |
| 第一章 单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性、流行特征及检测技术 | 第16-26页 |
| 1 生物学特性 | 第16-18页 |
| ·生长特性 | 第16-17页 |
| ·生化特性 | 第17页 |
| ·血清型 | 第17-18页 |
| 2 分布与流行情况 | 第18-19页 |
| ·分布情况 | 第18页 |
| ·流行情况 | 第18-19页 |
| 3 检测技术 | 第19-23页 |
| ·基于细菌表型方法 | 第20-21页 |
| ·传统分离培养检测及鉴定方法 | 第20页 |
| ·显色培养基鉴定技术 | 第20页 |
| ·生化复合试剂盒 | 第20-21页 |
| ·免疫化学方法 | 第21页 |
| ·分子检测技术 | 第21-23页 |
| ·探针检测技术 | 第21-22页 |
| ·DNA芯片 | 第22页 |
| ·PCR检测技术 | 第22-23页 |
| 4 结论 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-26页 |
| 第二章 单核细胞增多性李斯特菌胞内感染相关基因 | 第26-39页 |
| 1 转录活化因子(PrfA) | 第27-31页 |
| ·PrfA蛋白结构 | 第27页 |
| ·PrfA的协同因子假说 | 第27-29页 |
| ·PrfA突变体研究 | 第27-28页 |
| ·结构-功能分析 | 第28页 |
| ·证明协同因子的其它方法 | 第28-29页 |
| ·PrfA调节机制 | 第29-31页 |
| ·受调控基因启动子不同构型引起的表达差异 | 第29页 |
| ·PrfA自身调控机理 | 第29-30页 |
| ·PrfA活性的变构调节机制 | 第30页 |
| ·其他调控因素 | 第30-31页 |
| 2 李斯特菌溶血素(LLO) | 第31-32页 |
| 3 磷脂酶C | 第32-33页 |
| ·磷脂酰肌醇特异性磷脂酶(PlcA) | 第32页 |
| ·卵磷脂酶(PlcB) | 第32-33页 |
| 4 金属酶蛋白(Mpl) | 第33页 |
| 5 肌动蛋白聚集因子(ActA) | 第33-34页 |
| 6 己糖磷酸盐转运蛋白(Hpt) | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| 第二部分 试验研究 | 第39-64页 |
| 第三章 李斯特菌种别及毒力快速检测试剂盒冻干及应用 | 第40-51页 |
| 1 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株及培养基 | 第41页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第41-42页 |
| ·样品 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第42-43页 |
| ·模板的制备 | 第43页 |
| ·试剂盒冻干体系及PCR反应条件 | 第43页 |
| ·特异性试验 | 第43-44页 |
| ·冻干试剂盒检出Lm的敏感度 | 第44页 |
| ·冻干试剂盒直接从牛奶中检测低污染量Lm的试验 | 第44页 |
| ·稳定性试验 | 第44-45页 |
| ·食品中李斯特菌属污染情况调查 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| ·试剂盒和冻干试剂盒检测结果 | 第45-46页 |
| ·特异性试验 | 第46-47页 |
| ·敏感性试验 | 第47-48页 |
| ·稳定性试验 | 第48页 |
| ·食品中李斯特菌属污染情况调查结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 单核细胞增多性李斯特菌Mpl和PlcB蛋白的原核表达及免疫反应分析 | 第51-64页 |
| 1 材料与方法 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·菌株、载体与试验动物 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-59页 |
| ·序列分析与引物设计 | 第52-53页 |
| ·mpl与plcB目的基因片段的PCR扩增与割胶回收 | 第53页 |
| ·重组质粒pET30a-mpl和pET30a-plcB的构建 | 第53-55页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第55-56页 |
| ·表达蛋白过柱纯化 | 第56-57页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第57页 |
| ·Mpl和PlcB蛋白免疫反应性分析 | 第57-58页 |
| ·Lm阳性血清制备 | 第58-59页 |
| 2 结果 | 第59-62页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第59页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第59页 |
| ·目的基因表达产物的SDS-PAGE检测 | 第59-60页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第60-61页 |
| ·纯化蛋白浓度测定结果 | 第61页 |
| ·重组蛋白Western blotting检测 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白Elisa检测 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 结论与建议 | 第64-65页 |
| 附录:常用试剂及培养基 | 第65-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
