腺病毒介导重组人生长激素基因在兔和羊乳腺中高效表达的研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-44页 |
| ·腺病毒载体研究进展 | 第13-31页 |
| ·腺病毒基本生物学特性 | 第14-17页 |
| ·重组腺病毒载体 | 第17-27页 |
| ·腺病毒载体的应用 | 第27-31页 |
| ·腺病毒载体研究展望 | 第31页 |
| ·动物乳腺反应器生产重组蛋白的研究 | 第31-34页 |
| ·动物乳腺生物反应器表达重组蛋白的研究概况 | 第32-34页 |
| ·动物乳腺生物反应器存在的问题及发展前景 | 第34页 |
| ·人生长激素的研究进展 | 第34-44页 |
| ·人生长激素的基本结构 | 第35页 |
| ·人生长激素的分泌与调节 | 第35-36页 |
| ·人生长激素的生理作用 | 第36-37页 |
| ·重组人生长激素在临床上的应用 | 第37-40页 |
| ·重组人生长激素的研究状况 | 第40-44页 |
| 第二章 人生长激素基因的克隆及真核表达载体的构建 | 第44-59页 |
| ·材料与方法 | 第44-51页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·方法 | 第46-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·人脑垂体基因组的提取与hGH DNA 的扩增 | 第51页 |
| ·hGH DNA 序列分析 | 第51-54页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·人生长激素基因组基因的利用 | 第56页 |
| ·有关表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·绿色荧光报告基因的选择 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第三章 人生长激素基因在真核细胞中表达 | 第59-73页 |
| ·材料与方法 | 第59-66页 |
| ·材料 | 第59-61页 |
| ·方法 | 第61-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-70页 |
| ·去除表达载体原核序列 | 第66页 |
| ·CHO 细胞对G418 的抗性试验 | 第66-67页 |
| ·重组质粒转染CHO 细胞 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR 检测mRNA 的表达 | 第68-69页 |
| ·重组hGH 蛋白表达检测 | 第69页 |
| ·ELISA 检测重组hGH 表达含量 | 第69-70页 |
| ·重组hGH 的活性检测 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·关于表达载体原核序列 | 第70页 |
| ·利用IRES 将两种蛋白耦联表达 | 第70-71页 |
| ·关于外源基因导入方法 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 同源重组法制备人生长激素腺病毒载体 | 第73-81页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·方法 | 第74-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| ·腺病毒载体构建方法 | 第77-78页 |
| ·有关同源重组法构建重组腺病毒载体 | 第78-79页 |
| ·有关腺病毒载体的转化 | 第79页 |
| ·二次转化提高细菌内同源重组的成功率 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第五章 重组腺病毒在兔乳腺上皮细胞中的表达 | 第81-90页 |
| ·材料与方法 | 第81-85页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·方法 | 第82-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-86页 |
| ·重组腺病毒在HEK293 细胞中的包装 | 第85页 |
| ·重组腺病毒的纯化和滴度测定 | 第85页 |
| ·体外感染RME 细胞试验 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| ·关于重组腺病毒在乳腺上皮细胞中的表达 | 第86-87页 |
| ·腺病毒的感染机制 | 第87-88页 |
| ·腺病毒生产中的几个重要环节 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第六章 重组腺病毒在兔和羊乳腺中高效表达的研究 | 第90-96页 |
| ·材料与方法 | 第90-91页 |
| ·材料 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-94页 |
| ·重组蛋白在乳腺中表达检测 | 第91-92页 |
| ·乳腺中重组蛋白表达量检测 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-95页 |
| ·关于动物乳腺生物反应器 | 第94-95页 |
| ·关于重组蛋白表达量 | 第95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 结论及创新点 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 缩略词和中英文对照表 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简介 | 第115页 |
