| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 哺乳动物体细胞核移植研究概述 | 第14-34页 |
| ·哺乳动物胚胎细胞核移植的研究进展 | 第14页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植的研究进展 | 第14-15页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植的主要程序 | 第15-26页 |
| ·核供体体细胞的选择 | 第17页 |
| ·受体胞质的选择和准备 | 第17-22页 |
| ·供体体细胞核的移植 | 第22页 |
| ·重构胚的激活 | 第22-24页 |
| ·重组胚的培养和移植 | 第24-26页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植的相关机理 | 第26-30页 |
| ·体细胞核移植过程中受体胞质对供体核的重编程 | 第26-28页 |
| ·DNA 甲基化与动物克隆 | 第28-29页 |
| ·基因组印记与动物克隆 | 第29-30页 |
| ·提高体细胞核移植效率的措施 | 第30-34页 |
| ·受体卵母细胞的处理 | 第30-32页 |
| ·供体细胞的优化 | 第32-33页 |
| ·培养条件的优化 | 第33-34页 |
| 第二章 转基因动物的制作方法及应用前景 | 第34-42页 |
| ·转基因动物的制作方法 | 第34-37页 |
| ·原核显微注射法 | 第35页 |
| ·病毒载体法 | 第35-36页 |
| ·精子载体法 | 第36页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第36页 |
| ·体细胞核移植法 | 第36-37页 |
| ·转基因动物的应用 | 第37-40页 |
| ·培育具有抗病性能的动物新品种 | 第37页 |
| ·培育生产性能高的动物新品种 | 第37-38页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器与生物制药 | 第38-39页 |
| ·用于生物医学、遗传学、发育生物学和基因功能研究 | 第39页 |
| ·转基因动物生产人体器官 | 第39-40页 |
| ·转基因动物技术存在的问题 | 第40-42页 |
| ·转基因动物的成功率和成活率低 | 第40页 |
| ·外源导入基因的整合率低，效果不稳定 | 第40页 |
| ·外源导入基因的行为难以控制 | 第40页 |
| ·转基因的理论尚不完全清楚 | 第40页 |
| ·转基因动物的安全性问题 | 第40-42页 |
| 第三章 牛成纤维细胞分离培养及支持重构胚发育能力的初步评估 | 第42-50页 |
| ·材料和方法 | 第42-45页 |
| ·试剂与仪器 | 第42-43页 |
| ·牛成纤维细胞的分离、培养及冷冻 | 第43-44页 |
| ·体细胞核移植重构胚的构建及培养 | 第44-45页 |
| ·试验数据的统计分析 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·新生牛皮肤成纤维细胞的原代和传代培养以及生物学特性观察 | 第45-46页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的原代和传代培养以及生物学特性观察 | 第46-47页 |
| ·成纤维细胞染色体核型分析结果 | 第47页 |
| ·不同个体及来源的细胞作为供体细胞对克隆胚体外发育能力的影响 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 牛卵母细胞体外成熟对体细胞核移植的影响 | 第50-57页 |
| ·材料和方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·结果 | 第53-55页 |
| ·卵巢保存温度对不同级别COCs 回收率的影响 | 第53-54页 |
| ·卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟以及克隆胚发育的影响 | 第54页 |
| ·成熟培养液中添加不同浓度leptin 对卵母细胞体外成熟的影响 | 第54-55页 |
| ·成熟培养液中添加不同浓度的leptin 对体细胞克隆胚体外发育的影响 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 牛体细胞克隆胚体外培养的研究 | 第57-66页 |
| ·材料和方法 | 第58-60页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体外发育的速度及胚胎的外观形态的比较 | 第60-61页 |
| ·不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体外发育的影响 | 第61-62页 |
| ·不同培养液对体细胞克隆胚囊胚内细胞凋亡率的影响 | 第62页 |
| ·不同培养液对体细胞克隆胚囊胚内内细胞团细胞与滋养层细胞比例的影响 | 第62-63页 |
| ·不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体内发育的影响 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 第六章 体细胞核移植程序的优化 | 第66-76页 |
| ·材料与方法 | 第66-70页 |
| ·工具制备 | 第66-67页 |
| ·供体细胞的准备 | 第67-68页 |
| ·卵母细胞的收集及成熟 | 第68页 |
| ·受体卵母细胞的去核 | 第68页 |
| ·卵母细胞的注核 | 第68页 |
| ·卵母细胞与供体细胞的融合 | 第68-69页 |
| ·克隆胚的激活与体外培养 | 第69页 |
| ·试验设计 | 第69-70页 |
| ·试验数据的统计分析 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·不同去核方法对卵母细胞去核率及克隆胚后期发育的影响 | 第70-71页 |
| ·不同直径的供体细胞对体细胞克隆胚发育的影响 | 第71-72页 |
| ·融合方法对重组体融合率及早期胚胎发育的影响 | 第72页 |
| ·融合到激活间隔时间对体细胞克隆胚后期发育的影响 | 第72页 |
| ·供体细胞预处理方法对体细胞克隆胚发育的影响 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第七章 用优化的核移植技术生产转 hLYZ基因克隆牛 | 第76-87页 |
| ·材料和方法 | 第76-80页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-80页 |
| ·结果 | 第80-84页 |
| ·hLYZ 基因cDNA 的PCR 扩增结果 | 第80-81页 |
| ·重组质粒pEBH 鉴定 | 第81页 |
| ·hLYZ 的细胞转染 | 第81-82页 |
| ·基因转染对克隆胚体外发育的影响 | 第82页 |
| ·转基因克隆胚的检测 | 第82-83页 |
| ·转人溶菌酶基因体细胞克隆胚的移植 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-87页 |
| 第八章 用优化的核移植技术生产转 hBD3 基因克隆牛 | 第87-92页 |
| ·材料和方法 | 第87-89页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-89页 |
| ·结果 | 第89-90页 |
| ·克隆胚外源基因的检测 | 第89页 |
| ·转染及筛选操作对不同来源供体细胞的影响 | 第89-90页 |
| ·转hBD3 基因克隆胚的移植 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| 全文结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简历 | 第112-113页 |
