| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第5-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-15页 |
| ·动物细胞培养技术及其应用 | 第9-10页 |
| ·动物细胞培养的发展历史 | 第9-10页 |
| ·动物细胞培养的应用 | 第10页 |
| ·细胞生物学特性研究 | 第10-14页 |
| ·细胞形态学鉴定 | 第10-11页 |
| ·细胞复苏活力检测 | 第11页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第11页 |
| ·细胞系的微生物污染检测 | 第11-12页 |
| ·细胞染色体核型分析 | 第12-13页 |
| ·细胞同工酶酶谱分析 | 第13页 |
| ·荧光蛋白报告质粒在成纤维细胞中的表达 | 第13-14页 |
| ·建立合作猪肾成纤维细胞系的意义 | 第14-15页 |
| 第二部分 实验材料 | 第15-20页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·主要菌株 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要试剂的配置 | 第16-19页 |
| ·MEM培养液的配置 | 第16页 |
| ·DMEM培养液的配置 | 第16页 |
| ·RPMI1640培养液的配置 | 第16页 |
| ·HamF12培养液的配置 | 第16页 |
| ·0.25%胰蛋白酶溶液的配置 | 第16页 |
| ·PBS溶液的配置 | 第16-17页 |
| ·秋水仙素溶液的配置 | 第17页 |
| ·Giemsa染料的配置 | 第17页 |
| ·细胞冻存保护液的配置 | 第17页 |
| ·THIO的配置 | 第17页 |
| ·TSB的配置 | 第17页 |
| ·Hoechst 33258的配制 | 第17页 |
| ·4%多聚甲醛的配制 | 第17-18页 |
| ·增补剂与抑菌剂 | 第18页 |
| ·支原体液体培养基的制备 | 第18页 |
| ·同工酶分析所用试剂的配置 | 第18-19页 |
| ·A液的配置 | 第18页 |
| ·B液的配置 | 第18页 |
| ·C液的配置 | 第18页 |
| ·D液的配置 | 第18-19页 |
| ·E液的配置 | 第19页 |
| ·乳酸脱氢酶染色液配制 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19-20页 |
| 第三部分 合作猪肾成纤维细胞系的构建 | 第20-32页 |
| ·细胞培养操作 | 第20-21页 |
| ·原代培养 | 第20页 |
| ·细胞传代 | 第20-21页 |
| ·成纤维细胞的纯化与鉴定 | 第21-22页 |
| ·成纤维细胞的纯化 | 第21页 |
| ·成纤维细胞的鉴定 | 第21-22页 |
| ·成纤维细胞形态和结构鉴定 | 第21-22页 |
| ·成纤维细胞免疫组化鉴定 | 第22页 |
| ·细胞冻存 | 第22页 |
| ·细胞复苏 | 第22-23页 |
| ·细胞复苏活力检测 | 第23页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第23页 |
| ·细胞对培养液的选择 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·成纤维细胞形态学观察 | 第24-26页 |
| ·原代细胞形态 | 第24页 |
| ·传代细胞形态 | 第24页 |
| ·纯化后的细胞形态 | 第24页 |
| ·复苏后的细胞形态 | 第24-26页 |
| ·成纤维细胞鉴定结果 | 第26-28页 |
| ·成纤维细胞形态和亚显微结构 | 第26-27页 |
| ·成纤维细胞免疫组化染色结果 | 第27-28页 |
| ·成纤维细胞复苏活力检测结果 | 第28页 |
| ·成纤维细胞生长曲线和培养液选择结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-32页 |
| ·影响细胞培养的因素 | 第29-30页 |
| ·成纤维细胞的纯化 | 第30页 |
| ·成纤维细胞对培养液的选择 | 第30-31页 |
| ·成纤维细胞的免疫组化鉴定 | 第31-32页 |
| 第四部分 合作猪肾成纤维细胞系的鉴定 | 第32-47页 |
| ·染色体核型分析 | 第32-33页 |
| ·染色体制备 | 第32页 |
| ·核型分析 | 第32-33页 |
| ·乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析 | 第33-34页 |
| ·样品的制备 | 第33-34页 |
| ·电泳 | 第34页 |
| ·荧光蛋白报告质粒在合作猪肾成纤维细胞中的转染表达 | 第34-35页 |
| ·微生物污染检测 | 第35-37页 |
| ·细菌检测 | 第35页 |
| ·真菌检测 | 第35-36页 |
| ·支原体检测 | 第36页 |
| ·病毒检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-44页 |
| ·染色体分析结果 | 第37-40页 |
| ·乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析结果 | 第40页 |
| ·荧光蛋白报告质粒转染结果 | 第40-42页 |
| ·微生物污染检测结果 | 第42-44页 |
| ·细菌污染检测结果 | 第42页 |
| ·真菌污染检测结果 | 第42页 |
| ·支原体污染检测结果 | 第42-43页 |
| ·病毒检测结果 | 第43-44页 |
| ·分析 | 第44-47页 |
| ·细胞遗传学性状检测 | 第44-45页 |
| ·乳酸脱氢酶同工酶酶谱分析 | 第45页 |
| ·荧光蛋白报告质粒在成纤维细胞中的表达 | 第45-46页 |
| ·微生物污染对细胞培养的影响及污染检测 | 第46-47页 |
| 第五部分 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |