| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 上篇 文献综述 | 第16-58页 |
| 第一章 G蛋白偶联受体的研究进展 | 第16-42页 |
| 1 概述 | 第16页 |
| 2 G蛋白偶联受体的结构 | 第16-17页 |
| 3 G蛋白偶联受体的分类 | 第17-20页 |
| 4 G蛋白偶联受体的信号传递机制 | 第20-21页 |
| 5 G蛋白偶联受体在人类中的研究概述 | 第21-22页 |
| 6 G蛋白偶联受体在植物中的研究概述 | 第22-24页 |
| 7 G蛋白偶联受体在盘基网柄菌中的研究概述 | 第24-25页 |
| 8 G蛋白偶联受体在模式真菌中的研究概述 | 第25-31页 |
| ·G蛋白偶联受体在酿酒酵母中的研究概述 | 第25-27页 |
| ·G蛋白偶联受体在裂殖酵母中的研究概述 | 第27-28页 |
| ·G蛋白偶联受体在粗糙脉胞菌中的研究概述 | 第28-29页 |
| ·G蛋白偶联受体在构巢曲霉中的研究概述 | 第29页 |
| ·G蛋白偶联受体在新型隐球酵母菌中的研究概述 | 第29-31页 |
| 9 G蛋白偶联受体在卵菌中的研究概述 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-42页 |
| 第二章 RNA干扰技术在真菌及卵菌基因功能研究方面的应用 | 第42-58页 |
| 1 概述 | 第42-44页 |
| ·RNAi的发现 | 第42-43页 |
| ·RNAi的机理 | 第43-44页 |
| 2 RNAI在真菌基因功能研究中的应用 | 第44-49页 |
| ·RNAi在真菌基因功能研究中的策略 | 第45-48页 |
| ·RNA干扰技术和基因敲除技术的优缺点比较及分析 | 第48-49页 |
| 3 RNAI在卵菌基因功能研究中的应用 | 第49-52页 |
| ·卵菌中遗传转化体系的建立 | 第49-50页 |
| ·卵菌中RNAi技术的应用及发展 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 下篇 研究内容 | 第58-166页 |
| 第一章 大豆疫霉中利用双链RNA介导的基因沉默 | 第58-82页 |
| 1 材料与方法 | 第61-66页 |
| ·供试菌株 | 第61页 |
| ·大豆疫霉菌株的培养和无性发育各阶段菌体的获得 | 第61页 |
| ·大豆与大豆疫霉的互作早期侵染菌丝的获得 | 第61页 |
| ·目的基因的扩增及overlap PCR片段的获得 | 第61页 |
| ·dsRNA合成 | 第61-63页 |
| ·大豆疫霉瞬时转化 | 第63-64页 |
| ·SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第64-65页 |
| ·孢子囊的诱导 | 第65页 |
| ·致病性测定 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-76页 |
| ·大豆疫霉中PsCdc14和PsAvr3a的克隆及结构分析 | 第66-67页 |
| ·PsCdc14 dsRNA介导基因沉默转化子不能发育形成孢子囊 | 第67-69页 |
| ·PsAvr3a全长ORF序列合成的dsRNA介导靶基因沉默 | 第69-71页 |
| ·PsAvr3a C端部分序列合成的dsRNA介导靶基因沉默 | 第71-73页 |
| ·dsRNA介导的基因沉默具有序列特异性 | 第73页 |
| ·PsAvr3a-PsCdc14 dsRNA同时介导PsAvr3a和PsCdc14基因的沉默 | 第73-75页 |
| ·单个dsRNA和PsAvr3a-PsCdc14 dsRNA介导基因沉默效率的比较 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 第二章 大豆疫霉G蛋白偶联受体的生物信息学预测及转录分析 | 第82-108页 |
| 1 材料与方法 | 第84-87页 |
| ·数据库信息和同源检索 | 第84页 |
| ·多重序列比对和系统发育分析 | 第84-85页 |
| ·供试菌株 | 第85页 |
| ·培养基制备 | 第85页 |
| ·大豆疫霉RNA-Sequencing测序及实时定量RT-PCR分析样品的准备 | 第85页 |
| ·RNA的提取 | 第85-86页 |
| ·RNA-Sequencing分析GPCR候选编码基因的转录谱 | 第86页 |
| ·实时定量RT-PCR分析GPCR-PIPK基因家族的转录谱 | 第86-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-102页 |
| ·GPCR候选基因的挖掘 | 第87-89页 |
| ·GPCR候选编码基因的分类及同源性比较 | 第89-93页 |
| ·GPCR候选编码基因在基因组中的结构特征 | 第93-96页 |
| ·大豆疫霉GPCR候选编码基因在生长发育及致病过程中的转录谱分析 | 第96-98页 |
| ·大豆疫霉中PIPK基因家族的分析 | 第98-100页 |
| ·大豆疫霉中GPCR-PIPK编码基因的结构预测及实时定量分析其生活史各个阶段转录 | 第100-102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-108页 |
| 第三章 新型G蛋白偶联受体PSPIPK4参与调控大豆疫霉游动孢子休止及萌发 | 第108-130页 |
| 1 材料与方法 | 第110-115页 |
| ·供试菌株 | 第110页 |
| ·大豆疫霉菌株的培养和无性发育各阶段菌体的获得 | 第110-111页 |
| ·大豆与大豆疫霉的互作早期侵染菌丝的获得 | 第111页 |
| ·Southern杂交 | 第111-112页 |
| ·转化载体的构建 | 第112页 |
| ·大豆疫霉遗传转化 | 第112-114页 |
| ·PsPIPK4沉默突变体的表型分析 | 第114页 |
| ·SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第114-115页 |
| ·致病性测定 | 第115页 |
| ·趋化性分析 | 第115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-124页 |
| ·大豆疫霉PsPIPK4基因的克隆及结构分析 | 第115-117页 |
| ·PsPIPK4在生活史阶段及侵染阶段的转录分析 | 第117-118页 |
| ·PsPIPK4基因沉默突变体的获得 | 第118-119页 |
| ·PsPIPK4沉默突变体的表型分析 | 第119-124页 |
| 3 讨论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-130页 |
| 第四章 新型G蛋白偶联受体PSPIPK10参与调控大豆疫霉的有性生殖 | 第130-144页 |
| 1 材料与方法 | 第132-133页 |
| ·大豆疫霉菌株的培养和无性发育各阶段菌体的获得 | 第132页 |
| ·大豆与大豆疫霉的互作早期侵染菌丝的获得 | 第132页 |
| ·质粒构建和大豆疫霉转化 | 第132页 |
| ·PsPIPK10沉默突变体的表型分析 | 第132页 |
| ·SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第132页 |
| ·致病性测定 | 第132-133页 |
| 2 结果与分析 | 第133-140页 |
| ·大豆疫霉PsPIPK10基因的克隆及氨基酸序列结构分析 | 第133-134页 |
| ·PsPIPK10在生活史阶段及侵染阶段的转录分析 | 第134-135页 |
| ·PsPIPK10基因沉默突变体的获得 | 第135-136页 |
| ·PsPIPK10基因沉默突变体中卵孢子的形成受到影响 | 第136-138页 |
| ·卵磷脂对野生型菌株和PsPIPK10基因沉默突变体产卵孢子的影响 | 第138-139页 |
| ·致病性测定 | 第139-140页 |
| 3 讨论 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-144页 |
| 第五章 大豆疫霉SNARE蛋白家族生物信息学预测及PSYKT6的功能分析 | 第144-166页 |
| 1 材料与方法 | 第147-148页 |
| ·数据库信息和同源检索 | 第147页 |
| ·重序列比对和系统发育分析 | 第147页 |
| ·大豆疫霉菌株的培养和无性发育各阶段菌体的获得 | 第147页 |
| ·大豆与大豆疫霉的互作早期侵染菌丝的获得 | 第147页 |
| ·RNA-Sequencing分析SNARE候选编码基因的转录谱 | 第147页 |
| ·质粒构建和大豆疫霉转化 | 第147-148页 |
| ·PsYKT6沉默突变体的表型分析 | 第148页 |
| ·SYBR green实时定量RT-PCR分析 | 第148页 |
| ·致病性测定 | 第148页 |
| 2 结果与分析 | 第148-159页 |
| ·大豆疫霉SNARE蛋白家族的挖掘 | 第148-150页 |
| ·大豆疫霉SNARE候选编码基因的结构预测及转录分析 | 第150-152页 |
| ·大豆疫霉PsYKT6编码一个进化上及其保守的R-SNARE蛋白 | 第152-153页 |
| ·PsYKT6沉默突变体的获得 | 第153-154页 |
| ·PsYKT6沉默突变体表型分析 | 第154-156页 |
| ·PsYKT6沉默突变体致病性测定 | 第156-159页 |
| 3 讨论 | 第159-160页 |
| 参考文献 | 第160-166页 |
| 全文总结 | 第166-168页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第168-170页 |
| 致谢 | 第170页 |
