| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 血管结构与血管组织工程 | 第13-14页 |
| 1.2 生物材料的表面性质对血管壁细胞的影响 | 第14-15页 |
| 1.3 外泌体的生物合成与作用机制 | 第15-17页 |
| 1.4 微小RNA的生物合成与作用机制 | 第17-19页 |
| 1.5 本课题的研究思路与创新点 | 第19-20页 |
| 第二章 左旋聚乳酸（PLLA）静电纺丝薄膜的制备条件优化与表征 | 第20-29页 |
| 2.1 引言 | 第20-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 研究对象 | 第22页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第22页 |
| 2.2.3 PLLA静电纺丝材料的制备方法 | 第22页 |
| 2.2.4 PLLA静电纺丝薄膜的制备条件优化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 使用扫描电子显微镜观察静电纺丝膜表面形貌 | 第23页 |
| 2.2.6 排列有序或无序的静电纺丝薄膜的制备 | 第23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-27页 |
| 2.3.1 不同PLLA浓度静电纺丝薄膜的SEM表征 | 第23-24页 |
| 2.3.2 不同湿度条件下PLLA电纺丝膜的形貌变化 | 第24-25页 |
| 2.3.3 确定制备表面无序静电纺丝薄膜的优化条件 | 第25-26页 |
| 2.3.4 确定制备表面有序静电纺丝薄膜的优化条件 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 不同表面PLLA静电纺丝薄膜对人脐静脉内皮细胞生长分泌的影响 | 第29-50页 |
| 3.1 引言 | 第29-30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-39页 |
| 3.2.1 研究对象 | 第30页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第30-32页 |
| 3.2.3 人脐静脉内皮细胞的传代培养 | 第32-33页 |
| 3.2.4 电纺丝材料上人脐静脉内皮细胞的接种 | 第33页 |
| 3.2.5 使用激光扫描共聚焦显微镜观察有序及无序表面静电纺丝薄膜上种植的细胞 | 第33-34页 |
| 3.2.6 低外泌体血清培养液培养人脐静脉内皮细胞 | 第34页 |
| 3.2.7 人脐静脉内皮细胞外泌体的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.8 人脐静脉内皮细胞外泌体表面蛋白CD63的浓度测定 | 第35-36页 |
| 3.2.9 人脐静脉内皮细胞外泌体表面蛋白CD63的Western Blot鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.10 使用透射电镜观察鉴定人脐静脉内皮细胞分泌的外泌体 | 第37页 |
| 3.2.11 使用流式细胞术分析种植于不同表面静电纺丝薄膜上的细胞分泌的外泌体 | 第37-38页 |
| 3.2.12 使用抑制剂抑制细胞释放外泌体 | 第38-39页 |
| 3.2.12.1 抑制剂浓度优化实验 | 第38-39页 |
| 3.2.12.2 抑制不同表面静电纺丝薄膜材料上细胞分泌外泌体 | 第39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-48页 |
| 3.3.1 静电纺丝薄膜的表面结构影响细胞形态 | 第39页 |
| 3.3.2 使用低外泌体血清培养液的必要性 | 第39-41页 |
| 3.3.3 低外泌体血清培养液可以保证细胞正常生长 | 第41-43页 |
| 3.3.4 低外泌体血清培养液可以维持细胞分泌外泌体的能力 | 第43-44页 |
| 3.3.5 静电纺丝薄膜的表面有序结构促进细胞分泌外泌体 | 第44-45页 |
| 3.3.6 抑制剂对种植于表面有序静电纺丝薄膜上细胞分泌外泌体的抑制作用增强 | 第45-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 表面有序静电纺丝薄膜影响人脐静脉内皮细胞中的MICRORNA，进而对细胞进行调控 | 第50-61页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 材料与方法 | 第50-56页 |
| 4.2.1 研究对象 | 第50页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第50-51页 |
| 4.2.3 人脐静脉内皮细胞microRNA的提取 | 第51-52页 |
| 4.2.4 microRNA的反转录及qPCR检测 | 第52-54页 |
| 4.2.5 人脐静脉内皮细胞总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.6 mRNA的反转录及qPCR检测 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.1 microRNA引物的设计 | 第56页 |
| 4.3.2 人脐静脉内皮细胞内靶点mRNA引物的设计 | 第56-57页 |
| 4.3.3 静电纺丝薄膜的表面结构可调控人脐静脉内皮细胞microRNA的表达并改变下游靶点mRNA的水平 | 第57-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 表面有序静电纺丝薄膜影响人脐静脉内皮细胞的外泌体，转移培养液可调控平滑肌细胞表达 | 第61-79页 |
| 5.1 引言 | 第61-63页 |
| 5.2 材料与方法 | 第63-69页 |
| 5.2.1 研究对象 | 第63页 |
| 5.2.2 试剂与仪器 | 第63页 |
| 5.2.3 人动脉平滑肌细胞的传代培养 | 第63页 |
| 5.2.4 平滑肌细胞的转移上清培养系统与共培养系统 | 第63-65页 |
| 5.2.5 BODIPY染色的外泌体传递实验 | 第65页 |
| 5.2.6 人脐静脉内皮细胞分泌外泌体中microRNA的提取 | 第65-66页 |
| 5.2.7 microRNA的反转录及qPCR检测 | 第66页 |
| 5.2.8 人动脉平滑肌细胞总RNA的提取 | 第66页 |
| 5.2.9 mRNA的反转录及qPCR检测 | 第66页 |
| 5.2.10 使用抑制剂抑制外泌体对平滑肌细胞作用 | 第66-67页 |
| 5.2.11 平滑肌细胞蛋白质的提取与浓度测定 | 第67页 |
| 5.2.12 平滑肌细胞表达 α-SMA的Western Blot检测 | 第67页 |
| 5.2.13 平滑肌细胞增殖的EdU检测 | 第67-69页 |
| 5.3 结果 | 第69-77页 |
| 5.3.1 人脐静脉内皮细胞分泌的膜泡成分可传递至平滑肌细胞 | 第69-70页 |
| 5.3.2 静电纺丝薄膜的表面有序结构可影响人脐静脉内皮细胞外泌体microRNA的表达 | 第70页 |
| 5.3.3 平滑肌细胞内靶点mRNA引物的设计 | 第70-71页 |
| 5.3.4 静电纺丝薄膜的表面有序结构促进内皮细胞分泌miR-143/145，进而对平滑肌细胞mRNA的表达进行调控 | 第71-74页 |
| 5.3.4.1 转移内皮细胞上清液培养平滑肌细胞体系 | 第71-73页 |
| 5.3.4.2 内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系 | 第73-74页 |
| 5.3.5 抑制剂对种植于表面有序静电纺丝薄膜上内皮细胞、外泌体及平滑肌细胞内miR-143/145 的抑制作用增强 | 第74页 |
| 5.3.6 抑制剂对种植于表面有序静电纺丝薄膜上内皮细胞下游相关平滑肌细胞内 α-SMA和MYH11的抑制作用增强 | 第74-75页 |
| 5.3.7 静电纺丝薄膜的表面有序结构促进平滑肌细胞分化并抑制其增殖 | 第75-77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-79页 |
| 全文总结 | 第79-80页 |
| 研究展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第89-91页 |
