| 个人简历 | 第3-9页 |
| 英文缩略词索引 | 第9-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 材料与方法 | 第22-54页 |
| 1. 实验材料 | 第22-35页 |
| 1.1 胶质瘤样本 | 第22页 |
| 1.2 细胞株 | 第22页 |
| 1.3 转染材料 | 第22-28页 |
| 1.3.1 质粒 | 第22-27页 |
| 1.3.2 真核表达载体 | 第27页 |
| 1.3.3 小干扰RNA | 第27-28页 |
| 1.4 PCR引物 | 第28-29页 |
| 1.4.1 引物序列 | 第28-29页 |
| 1.4.2 引物稀释和储存 | 第29页 |
| 1.5 主要实验试剂及来源 | 第29-33页 |
| 1.5.1 细胞培养试剂的配制 | 第30-31页 |
| 1.5.2 qRT-PCR试剂配制 | 第31页 |
| 1.5.3 Western Blot试剂配制 | 第31-32页 |
| 1.5.4 质粒提取试剂配制 | 第32页 |
| 1.5.5 地西他滨配制 | 第32-33页 |
| 1.6 实验仪器 | 第33-35页 |
| 2. 实验方法 | 第35-54页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 2.1.1 MAGE-D4基因上游序列查找 | 第35页 |
| 2.1.2 MAGE-D4基因启动子预测 | 第35页 |
| 2.1.3 MAGE-D4启动子区域转录因子及结合位点预测 | 第35-36页 |
| 2.1.4 MAGE-D4/Sp1表达及相关性分析 | 第36页 |
| 2.2 甲基化质谱分析 | 第36-37页 |
| 2.2.1 DNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.2 甲基化检测 | 第37页 |
| 2.3 细胞的制备 | 第37-40页 |
| 2.3.1 细胞培养前准备 | 第37-38页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第38-39页 |
| 2.3.3 细胞种板 | 第39页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第39-40页 |
| 2.3.5 DAC处理细胞 | 第40页 |
| 2.4 质粒的制备 | 第40-43页 |
| 2.4.1 质粒转化 | 第40页 |
| 2.4.2 质粒提取 | 第40-41页 |
| 2.4.3 质粒浓度测定 | 第41页 |
| 2.4.4 甲基化质粒制备 | 第41-42页 |
| 2.4.5 质粒回收 | 第42-43页 |
| 2.5 荧光素酶活性检测 | 第43-44页 |
| 2.6 qRT-PCR | 第44-47页 |
| 2.6.1 实验前准备 | 第44页 |
| 2.6.2 细胞总RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.6.3 RNA浓度检测 | 第45页 |
| 2.6.4 cDNA合成 | 第45-46页 |
| 2.6.5 cDNA质量检测 | 第46-47页 |
| 2.6.6 PCR反应操作 | 第47页 |
| 2.6.7 结果分析 | 第47页 |
| 2.7 免疫印迹 | 第47-50页 |
| 2.7.1 核蛋白提取 | 第47-48页 |
| 2.7.2 蛋白浓度测定 | 第48页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE电泳 | 第48页 |
| 2.7.4 转膜 | 第48-49页 |
| 2.7.5 封闭 | 第49页 |
| 2.7.6 抗体孵育 | 第49页 |
| 2.7.7 显影 | 第49页 |
| 2.7.8 结果分析 | 第49-50页 |
| 2.8 染色质免疫共沉淀-qPCR | 第50-52页 |
| 2.8.1 细胞交联 | 第50页 |
| 2.8.2 细胞裂解 | 第50-51页 |
| 2.8.3 免疫共沉淀 | 第51页 |
| 2.8.4 蛋白/DNA复合物的洗脱和解交联 | 第51-52页 |
| 2.8.5 DNA回收和纯化 | 第52页 |
| 2.8.6 qRT-PCR检测DNA片段 | 第52页 |
| 2.8.7 结果分析 | 第52页 |
| 2.9 统计学分析 | 第52-54页 |
| 实验结果 | 第54-78页 |
| 3. MAGE-D4的生物信息学分析 | 第54-64页 |
| 3.1 MAGE-D4启动子预测 | 第54-55页 |
| 3.2 转录因子结合位点预测 | 第55-56页 |
| 3.3 MAGE-D4/Sp1在胶质瘤中的表达及相关分析 | 第56-64页 |
| 3.3.1 Oncomine数据库分析结果 | 第56-59页 |
| 3.3.2 GEPIA数据库分析结果 | 第59-64页 |
| 4. 甲基化质谱分析 | 第64-67页 |
| 4.1 MAGE-D4核心启动子的确定 | 第64-65页 |
| 4.2 MAGE-D4启动子甲基化状态 | 第65-67页 |
| 5. 甲基化对MAGE-D4启动子活性的影响 | 第67-68页 |
| 6. Sp1对MAGE-D4表达的影响 | 第68-73页 |
| 6.1 检测胶质瘤细胞株Sp1 mRNA表达 | 第69-70页 |
| 6.2 上调Sp1对MAGE-D4表达的影响 | 第70-71页 |
| 6.3 下调Sp1对MAGE-D4表达的影响 | 第71-73页 |
| 7. Sp1对MAGE-D4启动子活性的影响 | 第73-75页 |
| 7.1 Sp1增强MAGE-D4启动子活性 | 第73-74页 |
| 7.2 Sp1结合MAGE-D4启动子的验证 | 第74-75页 |
| 8. 甲基化和Sp1对MAGE-D4启动子的协同作用 | 第75-78页 |
| 8.1 去甲基化影响和Sp1协同提高MAGE-D4启动子活性 | 第75-76页 |
| 8.2 甲基化影响Sp1与MAGE-D4启动子的结合 | 第76-78页 |
| 讨论 | 第78-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 综述 | 第86-104页 |
| REFERENCES | 第99-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第105-136页 |
