| 第一部分 | 第8-96页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 实验材料 | 第17-21页 |
| 一、主要实验试剂 | 第17-19页 |
| 二、主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 三、溶液配制 | 第20-21页 |
| 实验方法 | 第21-64页 |
| 一、食管鳞癌组织标本的收集 | 第21页 |
| 二、食管鳞癌细胞系与永生化正常食管上皮细胞 | 第21-22页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第21页 |
| 2.2 细胞传代 | 第21-22页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第22页 |
| 三、组织及细胞系中基因组DNA和总RNA的提取 | 第22-24页 |
| 3.1 食管鳞癌组织基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.2 细胞系总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 四、细胞质与细胞核提取物的制备 | 第24-26页 |
| 4.1 细胞质与细胞核RNA的提取 | 第24-25页 |
| 4.2 细胞质与细胞核蛋白的提取 | 第25-26页 |
| 五、PCR检测mRNA的表达水平 | 第26-28页 |
| 5.1 反转录RT-PCR | 第26页 |
| 5.2 实时荧光定量PCR (rt-PCR) | 第26-28页 |
| 六、PCR产物胶回收 | 第28-29页 |
| 七、载体质粒克隆 | 第29页 |
| 八、质粒提取 | 第29-30页 |
| 8.1 质粒小提 | 第29-30页 |
| 8.2 质粒中提 | 第30页 |
| 九、Western Blot检测蛋白的表达水平 | 第30-33页 |
| 9.1 细胞总蛋白的提取 | 第30-31页 |
| 9.2 蛋白浓度的测定 | 第31-32页 |
| 9.3 Western Blot蛋白印迹检测 | 第32-33页 |
| 十、快速cDNA末端扩增 | 第33-35页 |
| 10.1 引物设计 | 第33页 |
| 10.2 cDNA的合成 | 第33-34页 |
| 10.3 cDNA末端快速扩增PCR (RACE-PCR) | 第34-35页 |
| 十一、Northern Blot | 第35-37页 |
| 11.1 DIG-RNA标记 | 第35-36页 |
| 11.2 RNA甲醛凝胶电泳 | 第36页 |
| 11.3 RNA的转膜与固定 | 第36页 |
| 11.4 杂交 | 第36-37页 |
| 11.5 免疫检测 | 第37页 |
| 十二、RNA-FISH | 第37-39页 |
| 十三、DNA电泳迁移率实验(DNA-EMSA) | 第39-40页 |
| 十四、染色质免疫沉淀(ChIP) | 第40-46页 |
| 十五、双荧光素酶报告基因 | 第46页 |
| 十六、RNA-pulldown | 第46-48页 |
| 十七、RNA m5C甲基化检测 | 第48-49页 |
| 十八、RNA测序(RNA-Seq) | 第49-59页 |
| 十九、细胞功能实验 | 第59-63页 |
| 19.1 慢病毒的包装 | 第59页 |
| 19.2 目的细胞感染 | 第59-60页 |
| 19.3 细胞增殖 | 第60页 |
| 19.4 细胞周期 | 第60-61页 |
| 19.5 细胞凋亡 | 第61-62页 |
| 19.6 细胞迁移 | 第62页 |
| 19.7 细胞侵袭 | 第62-63页 |
| 二十、统计学分析 | 第63-64页 |
| 实验结果 | 第64-88页 |
| 一、LncRNA NMR在食管鳞癌组织中高表达并提示不良预后 | 第64-69页 |
| 1.1 LncRNA NMR在食管鳞癌组织芯片中的表达情况 | 第64-65页 |
| 1.2 LncRNA NMR在TCGA数据库中多种常见肿瘤中的表达情况 | 第65-68页 |
| 1.3 LncRNA NMR在独立验证样本中的表达情况 | 第68-69页 |
| 二、LncRNA NMR的分子特征 | 第69-71页 |
| 三、食管鳞癌细胞系的选择与构建 | 第71-73页 |
| 3.1 食管鳞癌细胞系的挑选 | 第71-72页 |
| 3.2 LncRNA NMR敲降与过表达细胞系的构建 | 第72-73页 |
| 四、LncRNA NMR能够促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 | 第73-75页 |
| 五、LncRNA NMR能够抑制顺铂和紫杉醇诱导的细胞凋亡 | 第75-77页 |
| 六、LncRNA NMR的转录受NF-κB的调控 | 第77-81页 |
| 6.1 ENCODE计划中ChIP-Seq数据分析 | 第77-79页 |
| 6.2 NF-κB结合lncRNA NMR上游序列并促进转录活动 | 第79-80页 |
| 6.3 TNF-α和IL-1β通过激活NF-κB上调lncRNANMR的表达 | 第80-81页 |
| 七、LncRNA NMR能够直接结合NSUN2和BPTF | 第81-86页 |
| 八、LncRNA NMR通过激活ERK通路上调MMP3和MMP10的表达 | 第86-88页 |
| 讨论 | 第88-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-96页 |
| 第二部分 | 第96-123页 |
| 中英文缩略词表 | 第97-98页 |
| 摘要 | 第98-99页 |
| ABSTRACT | 第99-101页 |
| 前言 | 第101-103页 |
| 实验材料 | 第103-104页 |
| 一、实验试剂 | 第103页 |
| 二、主要仪器设备 | 第103-104页 |
| 实验方法 | 第104-106页 |
| 一、食管鳞癌组织标本收集 | 第104页 |
| 二、表达谱芯片数据处理 | 第104页 |
| 三、生物信息分析 | 第104页 |
| 四、免疫组织化学分析 | 第104-105页 |
| 五、统计学分析 | 第105-106页 |
| 实验结果 | 第106-117页 |
| 一、食管鳞癌中差异表达的免疫相关基因 | 第106-109页 |
| 二、食管鳞癌中免疫相关基因的预后价值分析 | 第109-111页 |
| 三、免疫组化验证差异表达免疫相关基因 | 第111-112页 |
| 四、免疫组化验证预后相关免疫相关基因 | 第112-114页 |
| 五、预后相关因子与临床病理之间的相关性分析 | 第114-117页 |
| 讨论 | 第117-120页 |
| 小结 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-123页 |
| 附表 | 第123-145页 |
| 墓金资助 | 第145-146页 |
| 在学期间发表论文 | 第146-147页 |
| 文献综述 | 第147-164页 |
| 参考文献 | 第157-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
| 个人简历 | 第165-166页 |
