| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 一、引言 | 第12-34页 |
| 1.1 微藻及其应用前景 | 第12-14页 |
| 1.1.1 微藻生物能源 | 第12页 |
| 1.1.2 微藻固碳 | 第12-13页 |
| 1.1.3 微藻作为外源蛋白质的表达系统 | 第13-14页 |
| 1.2 微藻细胞油脂合成机理 | 第14-20页 |
| 1.2.1 微藻油脂的合成代谢途径 | 第14-16页 |
| 1.2.2 藻种筛选及诱导培养 | 第16-19页 |
| 1.2.3 微藻的大规模培养 | 第19-20页 |
| 1.3 莱茵衣藻 | 第20-29页 |
| 1.3.1 莱茵衣藻基因组测序 | 第20-21页 |
| 1.3.2 莱茵衣藻突变体库及应用 | 第21页 |
| 1.3.3 莱茵衣藻TAG合成途径中的重要蛋白质 | 第21-24页 |
| 1.3.4 莱茵衣藻非生物胁迫应答 | 第24-29页 |
| 1.4 莱茵衣藻的内参蛋白质 | 第29-31页 |
| 1.4.1 内参蛋白质及其用途 | 第29-30页 |
| 1.4.2 常见的微藻内参蛋白质 | 第30-31页 |
| 1.4.3 内参蛋白质应用中的问题 | 第31页 |
| 1.5 逆境胁迫应答的蛋白质标志物 | 第31-32页 |
| 1.5.1 蛋白质标志物及其用途 | 第31页 |
| 1.5.2 莱茵衣藻的标志物蛋白质 | 第31-32页 |
| 1.5.3 蛋白质标志物应用中的问题 | 第32页 |
| 1.6 “组”学技术在莱茵衣藻研究中的应用 | 第32-33页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第33-34页 |
| 二、材料与方法 | 第34-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 莱茵衣藻藻种 | 第34页 |
| 2.1.2 培养基 | 第34页 |
| 2.1.3 基因克隆表达试验所用工程菌及质粒载体 | 第34页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第34页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2 试验方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 试验方法藻种的复壮、杂菌去除及单克隆藻种的获得 | 第35页 |
| 2.2.2 莱茵衣藻预培养 | 第35页 |
| 2.2.3 莱茵衣藻非生物胁迫 | 第35-36页 |
| 2.2.4 莱茵衣藻表型观察与取材 | 第36页 |
| 2.2.5 总蛋白质的提取与定量 | 第36页 |
| 2.2.6 重组抗原的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.7 多肽抗原的分析及抗体制备 | 第37页 |
| 2.2.8 Dot-blot试验 | 第37页 |
| 2.2.9 免疫印迹检测(Western blot,WB) | 第37-38页 |
| 2.2.10 数据的采集与统计分析 | 第38页 |
| 2.2.11 细胞内油体的显微观察 | 第38页 |
| 2.2.12 中性脂含量测定 | 第38-39页 |
| 2.2.13 总酯含量测定 | 第39页 |
| 2.2.14 MRM蛋白质提取 | 第39-40页 |
| 2.2.15 MRM蛋白质的酶解 | 第40页 |
| 2.2.16 肽段的纯化 | 第40页 |
| 2.2.17 混合样本质谱检测 | 第40页 |
| 2.2.18 MRM方法建立 | 第40-42页 |
| 三、结果与分析 | 第42-86页 |
| 3.1 藻种的纯化 | 第42页 |
| 3.2 莱茵衣藻液体生长曲线 | 第42-43页 |
| 3.3 非生物胁迫对莱茵衣藻生长的影响 | 第43-47页 |
| 3.3.1 细胞密度的变化 | 第43-45页 |
| 3.3.2 莱茵衣藻培养物的表型变化 | 第45页 |
| 3.3.3 总蛋白质含量的变化 | 第45-47页 |
| 3.4 标志蛋白质的选择 | 第47页 |
| 3.5 抗原蛋白质的表达、合成及抗体制备 | 第47-48页 |
| 3.6 抗体特异性验证 | 第48-49页 |
| 3.7 候选蛋白质的表达特征 | 第49-54页 |
| 3.7.1 结构与信号受体类蛋白质 | 第49-50页 |
| 3.7.2 光合作用类蛋白质 | 第50-52页 |
| 3.7.3 代谢相关类蛋白质 | 第52页 |
| 3.7.4 其它蛋白质 | 第52-54页 |
| 3.8 内参蛋白质的筛选 | 第54-55页 |
| 3.9 标志物蛋白质的筛选 | 第55-56页 |
| 3.10 油脂合成目标蛋白质的选择 | 第56-58页 |
| 3.11 多肽抗原设计及抗体制备 | 第58-59页 |
| 3.12 正常/缺氮培养莱茵衣藻表型观察 | 第59-61页 |
| 3.12.1 培养物颜色变化 | 第59-60页 |
| 3.12.2 细胞密度变化 | 第60-61页 |
| 3.13 缺氮胁迫对细胞形态与中性脂合成的影响 | 第61-62页 |
| 3.14 中性脂和总脂含量测定 | 第62-64页 |
| 3.15 总蛋白质含量变化 | 第64-65页 |
| 3.16 油脂合成途径重要蛋白质的表达特征 | 第65-76页 |
| 3.16.1 脂肪酸合成蛋白质 | 第65-66页 |
| 3.16.2 脂肪酸去饱和酶FAD7蛋白质 | 第66-67页 |
| 3.16.3 半乳糖脂合成蛋白质 | 第67-68页 |
| 3.16.4 磷脂合成蛋白质PIS1 | 第68-69页 |
| 3.16.5 硫脂合成蛋白质 | 第69-70页 |
| 3.16.6 二酰甘油三甲基高丝氨酸合成蛋白质 | 第70-71页 |
| 3.16.7 TAG合成相关蛋白质 | 第71-72页 |
| 3.16.8 油体结构蛋白质 | 第72-73页 |
| 3.16.9 脂类运输相关蛋白质 | 第73-74页 |
| 3.16.10 脂肪酶蛋白质 | 第74-75页 |
| 3.16.11 β-氧化途径相关蛋白质 | 第75页 |
| 3.16.12 调控蛋白质 | 第75-76页 |
| 3.17 MRM蛋白质提取与定量 | 第76-77页 |
| 3.18 MRM鉴定结果 | 第77-78页 |
| 3.19 靶标蛋白质的丰度变化 | 第78-79页 |
| 3.20 油脂合成相关蛋白质的选择 | 第79-80页 |
| 3.21 多肽抗原设计及抗体制备 | 第80-81页 |
| 3.22 候选蛋白质的表达特征 | 第81-86页 |
| 3.22.1 基于RNA-Seq数据确定的候选蛋白质 | 第81-82页 |
| 3.22.2 基于质谱技术确定的候选蛋白质 | 第82-83页 |
| 3.22.3 基于RT-PCR数据确定的候选蛋白质 | 第83-84页 |
| 3.22.4 基于遗传学试验确定的候选蛋白质 | 第84页 |
| 3.22.5 基于同源性分析确定的候选蛋白质 | 第84-86页 |
| 四、小结与讨论 | 第86-89页 |
| 4.1 莱茵衣藻非生物胁迫应答 | 第86页 |
| 4.2 莱茵衣藻内参及标志物蛋白质的筛选鉴定 | 第86-87页 |
| 4.3 莱茵衣藻油脂合成途径重要蛋白质的表达特征研究-基于抗体的策略 | 第87页 |
| 4.4 莱茵衣藻油脂合成途径重要蛋白质的表达特征研究-基于质谱MRM的策略 | 第87-88页 |
| 4.5 莱茵衣藻油脂合成相关蛋白质的表达特征分析 | 第88-89页 |
| 五、总结及展望 | 第89-91页 |
| 5.1 总结 | 第89-90页 |
| 5.2 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 附录 | 第102-103页 |
| 在读期间发表的论文 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
