| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-27页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 CO_2固定路径 | 第10-13页 |
| 1.2.1 自然界已发现的固碳路径 | 第10-11页 |
| 1.2.2 人工合成的固碳路径 | 第11-12页 |
| 1.2.3 改造异养微生物为自养微生物的研究 | 第12-13页 |
| 1.3 CO_2还原力的供给模式 | 第13-18页 |
| 1.3.1 直接接触的微生物电合成体系 | 第13-16页 |
| 1.3.2 氢气介导的微生物电合成体系 | 第16页 |
| 1.3.3 甲酸介导的微生物电合成体系 | 第16-17页 |
| 1.3.4 其他化合物介导的微生物电合成体系 | 第17-18页 |
| 1.4 酶催化的电合成体系 | 第18-23页 |
| 1.4.1 直接接触的酶催化电合成体系 | 第18-20页 |
| 1.4.2 基于媒介的酶催化电合成体系 | 第20-23页 |
| 1.5 研究工作的提出 | 第23-27页 |
| 1.5.1 研究意义与目的 | 第23-24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-27页 |
| 第2章 材料和方法 | 第27-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-38页 |
| 2.1.1 菌种 | 第27页 |
| 2.1.2 基因及引物 | 第27-30页 |
| 2.1.3 质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第31-34页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.1.6 培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.7 配制试剂 | 第36-38页 |
| 2.2 分子操作方法 | 第38-49页 |
| 2.2.1 接种与保存甘油菌 | 第38页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 DNA片段的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.4 酶切反应 | 第40页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.2.6 DNA凝胶回收 | 第41-42页 |
| 2.2.7 DNA产物纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第43页 |
| 2.2.9 Golden Gate组装 | 第43-44页 |
| 2.2.10 Gibson组装 | 第44-46页 |
| 2.2.11 E.coli S17-1感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.2.12 E.coli S17-1感受态细胞的转化 | 第46-47页 |
| 2.2.13 大批量质粒转化 | 第47页 |
| 2.2.14 E.coli S17-1将质粒接合转移至R.eutropha H | 第47页 |
| 2.2.15 菌落PCR | 第47-49页 |
| 2.3 FDH的表达纯化与检测 | 第49-53页 |
| 2.3.1 重组FDH的诱导表达 | 第49页 |
| 2.3.2 FDH的纯化 | 第49-51页 |
| 2.3.3 FDH的SDS-PAGE电泳检验 | 第51-53页 |
| 2.4 MES的构建及产物测定 | 第53-57页 |
| 2.4.1 菌株培养 | 第53页 |
| 2.4.2 MES的预处理 | 第53-54页 |
| 2.4.3 MES的组装 | 第54-55页 |
| 2.4.4 产物PHB的预处理及HPLC检测 | 第55-57页 |
| 第3章 酶-菌复合体系的构建和条件优化 | 第57-69页 |
| 3.1 FDH和电子载体的筛选 | 第57-59页 |
| 3.1.1 FDH质粒表达载体的构建 | 第57页 |
| 3.1.2 FDH的酶活力测定 | 第57-59页 |
| 3.1.3 NADH再生效率的探究 | 第59页 |
| 3.2 酶-菌复合电催化系统的条件优化 | 第59-60页 |
| 3.2.1 MES中电位条件的探究 | 第60页 |
| 3.2.2 MES中NR浓度的探究 | 第60页 |
| 3.2.3 FDH对MES的影响 | 第60页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 3.3.1 不同来源的FDH酶活力的比较 | 第60-62页 |
| 3.3.2 不同电子载体对NADH再生效率的影响 | 第62-65页 |
| 3.3.3 不同电位条件对电合成效率的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.4 中性红浓度对电合成效率和细胞生长的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.5 FDH对电合成效率的影响 | 第67-68页 |
| 3.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第4章 R.eutropha中CO_2固定路径的改造 | 第69-79页 |
| 4.1 启动子的筛选 | 第69-71页 |
| 4.1.1 载体pHG12的构建 | 第69-70页 |
| 4.1.2 含有不同启动子的载体pHG12-promoter的构建 | 第70页 |
| 4.1.3 连有红色荧光蛋白的质粒载体的构建 | 第70-71页 |
| 4.1.4 菌株培养及处理 | 第71页 |
| 4.1.5 菌体红色荧光蛋白表达量的测定 | 第71页 |
| 4.2 固碳路径关键基因的异源强化表达 | 第71-74页 |
| 4.2.1 重组表达载体pHG12B-S-L的构建 | 第72-73页 |
| 4.2.2 重组核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶的诱导表达 | 第73页 |
| 4.2.3 氮含量的探究 | 第73-74页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第74-76页 |
| 4.3.1 不同启动子对红色荧光蛋白表达量的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.2 不同浓度诱导剂对电合成效率的影响 | 第75页 |
| 4.3.3 氮含量对电合成效率的影响 | 第75-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-79页 |
| 第5章 结论和展望 | 第79-81页 |
| 5.1 结论 | 第79-80页 |
| 5.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-99页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第99-101页 |
| 附录 | 第101-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
