| 内容摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 绪论 | 第15-32页 |
| 1.1 Bt毒素和昆虫的Bt抗性 | 第15-19页 |
| 1.1.1 δ-内毒素的多样性 | 第15页 |
| 1.1.2 昆虫中肠毒素受体的种类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 BT毒素杀虫作用方式 | 第16-18页 |
| 1.1.4 转基因作物在中国的应用 | 第18页 |
| 1.1.5 BT抗性机制 | 第18-19页 |
| 1.2 ABC蛋白超家族 | 第19-24页 |
| 1.2.1 ABC(ATP binding cassette)转运蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.2 家蚕ABC转运蛋白的系统发育分析 | 第20-22页 |
| 1.2.3 家蚕ABC转运子亚家族的特征 | 第22-23页 |
| 1.2.4 ABC蛋白在Bt毒素作用模式中的角色 | 第23-24页 |
| 1.2.5 ABC的转录调控 | 第24页 |
| 1.3 Forkhead家族 | 第24-27页 |
| 1.3.1 Forkhead转录因子 | 第24-25页 |
| 1.3.2 Forkhead结构域 | 第25-26页 |
| 1.3.3 FOXA亚家族 | 第26-27页 |
| 1.4 离体细胞培养在BT作用机制研究中的应用 | 第27-30页 |
| 1.4.1 昆虫细胞系作为BT抗性研究的材料 | 第29页 |
| 1.4.2 细胞系的鉴定 | 第29-30页 |
| 1.4.3 本实验室在使用昆虫离体细胞研究BT抗性机制方面的基础 | 第30页 |
| 1.5 本实验的研究内容、研究目的与意义 | 第30-32页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 1.5.2 研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二章 棉铃虫HNU-Ha-MG1中肠细胞系的建立及其对Bt毒素敏感性的分析 | 第32-49页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 材料 | 第32-33页 |
| 2.2.1 细胞系和细胞培养基 | 第32-33页 |
| 2.2.2 其它试剂和质粒 | 第33页 |
| 2.2.3 昆虫细胞培养基及配制 | 第33页 |
| 2.3 方法 | 第33-37页 |
| 2.3.1 HNU-Ha-MG1细胞系的建立 | 第33-34页 |
| 2.3.2 从棉铃虫中肠分离干细胞 | 第34页 |
| 2.3.3 HNU-Ha-MG1细胞系的转染与透射电子显微镜下的观察 | 第34页 |
| 2.3.4 酯酶同工酶的分析 | 第34-35页 |
| 2.3.5 染色体计数 | 第35页 |
| 2.3.6 昆虫细胞基因组的提取 | 第35页 |
| 2.3.7 昆虫细胞系的随机引物扩增分析(RAPD) | 第35-36页 |
| 2.3.8 20-羟基蜕皮酮处理 | 第36页 |
| 2.3.9 杆状病毒感染 | 第36-37页 |
| 2.3.10 活化Bt杀虫蛋白晶体处理HNU-Ha-MG1细胞 | 第37页 |
| 2.4 结果 | 第37-46页 |
| 2.4.1 棉铃虫中肠细胞的建立和形态学分析 | 第37-39页 |
| 2.4.2 转染效率分析 | 第39-40页 |
| 2.4.3 杆状病毒感染 | 第40页 |
| 2.4.4 HNU-Ha-MG1细胞酯酶同工酶的分析 | 第40-41页 |
| 2.4.5 HNU-Ha-MG1细胞的染色体核型分析 | 第41-42页 |
| 2.4.6 HNU-Ha-MG1细胞系随机扩增片段的分布 | 第42-43页 |
| 2.4.7 激素处理对HNU-Ha-MG1细胞死亡和自噬的影响 | 第43-44页 |
| 2.4.8 HNU-Ha-MG1细胞对HaNPV和AcMNPV病毒感染的易感度 | 第44-45页 |
| 2.4.9 HNU-Ha-MG1细胞对Cry1Ac以及Cry1C的易感性 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-48页 |
| 2.6 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 斜纹夜蛾ABCC3启动子的克隆与功能分析 | 第49-68页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 材料 | 第50-51页 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 | 第50页 |
| 3.2.2 实验质粒 | 第50-51页 |
| 3.3 方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 提取Sl-HP细胞基因组DNA | 第51页 |
| 3.3.2 染色体步移扩增ABCC3 5端上游侧翼序列 | 第51-52页 |
| 3.3.3 ABCC3转录起始位点的测定 | 第52页 |
| 3.3.4 启动子序列的生物信息学分析和转录因子结合位点预测 | 第52页 |
| 3.3.5 ABCC3启动子在昆虫细胞内启动活性分析 | 第52-53页 |
| 3.3.6 启动子活性检测重组载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.7 数据统计与分析 | 第54页 |
| 3.4 实验结果 | 第54-65页 |
| 3.4.1 启动子序列扩增 | 第54页 |
| 3.4.2 转录起始位点分析 | 第54-55页 |
| 3.4.3 启动子生物信息学分析和转录因子结合位点预测 | 第55-57页 |
| 3.4.4 ABCC3启动子在昆虫细胞内的活性分析 | 第57页 |
| 3.4.5 SlABCC3启动子5'初步截短策略和活性分析 | 第57-59页 |
| 3.4.6 启动子正调控区域进一步截短策略与活性分析 | 第59-61页 |
| 3.4.7 启动子负调控区域的研究 | 第61-62页 |
| 3.4.8 启动子基础转录区域活性分析 | 第62-63页 |
| 3.4.9 启动子调控区域顺式作用元件的分析 | 第63-64页 |
| 3.4.10 SlABCC3启动子3'初步截短策略和活性分析 | 第64-65页 |
| 3.5 讨论 | 第65-67页 |
| 3.5.1 SlABCC3启动子的克隆 | 第65-66页 |
| 3.5.2 启动子顺式作用元件的预测和确定 | 第66-67页 |
| 3.5.3 ABCC3的转录起始位点 | 第67页 |
| 3.6 小结 | 第67-68页 |
| 第四章 棉铃虫ABCC2基因启动子的克隆与功能分析 | 第68-74页 |
| 4.1 前言 | 第68页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 棉铃虫基因组DNA的提取(详见第2章) | 第68页 |
| 4.2.2 启动子扩增(详见第2章) | 第68-69页 |
| 4.2.3 启动子活性的测定(详见前一章) | 第69页 |
| 4.3 实验结果 | 第69-72页 |
| 4.4 总结与讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 FOXA对Bt毒素受体基因表达和昆虫毒素敏感性的调控 | 第74-95页 |
| 5.1 前言 | 第74页 |
| 5.2 材料与方法 | 第74-75页 |
| 5.2.1 昆虫与试剂 | 第74-75页 |
| 5.2.2 实验用质粒 | 第75页 |
| 5.3 实验方法 | 第75-79页 |
| 5.3.1 斜纹夜蛾和家蚕中肠cDNA的合成 | 第75页 |
| 5.3.2 转录因子真核表达载体的构建 | 第75-76页 |
| 5.3.3 FoxA对鳞翅目昆虫细胞介导BT毒素毒力的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.4 ABCC3启动子与转录因子共转染 | 第77页 |
| 5.3.5 SlFoxA在细胞内定位的观察 | 第77页 |
| 5.3.6 Western-blot检测 | 第77页 |
| 5.3.7 实时荧光定量PCR检测 | 第77-78页 |
| 5.3.8 Genebank登录号 | 第78-79页 |
| 5.3.9 棉铃虫FOXA基因表达的干扰 | 第79页 |
| 5.4 结果 | 第79-92页 |
| 5.4.1 SlFoxA生物信息学分析与预测 | 第79-80页 |
| 5.4.2 FoxA同源建模和系统发育树的构建 | 第80-83页 |
| 5.4.3 BT抗性细胞超表达SlFoxA后对Cry1Ac毒素的敏感性分析 | 第83-85页 |
| 5.4.4 各转录因子对启动子活性的影响 | 第85页 |
| 5.4.5 ABCC3启动子与SlFoxA转录因子结合区域的分析 | 第85-86页 |
| 5.4.6 SlFoxA细胞定位与外源性表达的鉴定 | 第86-87页 |
| 5.4.7 SlFoxA细胞亚定位情况 | 第87-89页 |
| 5.4.8 FOXA超表达对Sf9细胞中ABCC2和ABCC3基因表达的影响 | 第89页 |
| 5.4.9 棉铃虫FOXA基因表达的干扰及其对虫体的Bt毒素敏感性的影响 | 第89-92页 |
| 5.5 讨论 | 第92-94页 |
| 5.6 小结 | 第94-95页 |
| 论文创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 攻读博士学位期间发表的学位论文 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
