| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词及注解 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 小单孢菌的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 氨基糖苷类抗生素简介 | 第12页 |
| 1.3 庆大霉素及其研究进展 | 第12-20页 |
| 1.3.1 庆大霉素的理化性质 | 第12-13页 |
| 1.3.2 庆大霉素生物合成研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3.3 G418及其生物合成研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.4 庆大霉素发酵研究进展及代谢调控 | 第17-18页 |
| 1.3.5 庆大霉素提取精制研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.5.1 传统提炼工艺简介 | 第18页 |
| 1.3.5.2 提炼工艺的发展概述 | 第18页 |
| 1.3.5.3 精制工艺的发展概述 | 第18-19页 |
| 1.3.6 庆大霉素含量检测方法 | 第19-20页 |
| 1.3.6.1 微生物鉴定法管碟法 | 第19页 |
| 1.3.6.2 微生物比浊法 | 第19页 |
| 1.3.6.3 薄层色谱法(TLC) | 第19-20页 |
| 1.3.6.4 高效液相色谱法(HPLC) | 第20页 |
| 1.3.6.5 旋光法 | 第20页 |
| 1.4 小单孢菌基因工程研究方法简介 | 第20-22页 |
| 1.4.1 基因阻断 | 第21-22页 |
| 1.4.1.1 单交换插入失活 | 第21页 |
| 1.4.1.2 双交换插入失活 | 第21页 |
| 1.4.1.3 框内敲除 | 第21页 |
| 1.4.1.4 Cas9/gRNA系统 | 第21-22页 |
| 1.4.2 基因重组 | 第22页 |
| 1.4.2.1 接合转移法 | 第22页 |
| 1.4.2.2 基因替换 | 第22页 |
| 1.4.2.3 原生质体融合 | 第22页 |
| 1.5 选题依据与研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 培养基及其配方 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂材料 | 第25-28页 |
| 2.1.3.1 主要试剂材料与试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.3.2 工具酶 | 第26页 |
| 2.1.3.3 主要溶液与缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.1.3.4 抗生素 | 第27-28页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| 2.2.3 DNA酶切 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR(聚合酶链式反应) | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 PCR反应体系的选择 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 PCR反应程序 | 第31页 |
| 2.2.5 DNA片段的回收 | 第31-32页 |
| 2.2.6 DNA酶连体系 | 第32页 |
| 2.2.7 小单孢菌基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.8 核酸电泳 | 第33页 |
| 2.2.9 大肠杆菌与绛红小单孢菌的接合转移 | 第33-34页 |
| 2.2.10 小单孢菌的摇瓶发酵 | 第34页 |
| 2.2.11 庆大霉素生物效价的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.12 代谢产物的提取与精制 | 第35页 |
| 2.2.13 代谢产物分析方法 | 第35-36页 |
| 2.2.13.1 薄层层析(TLC)法 | 第36页 |
| 2.2.13.2 质谱分析法 | 第36页 |
| 2.2.14 G418分离纯化研究 | 第36-38页 |
| 2.2.14.1 树脂预处理 | 第36页 |
| 2.2.14.2 树脂的装填 | 第36页 |
| 2.2.14.3 色素含量检测 | 第36页 |
| 2.2.14.4 树脂静态交换容量与体系pH关系的考察 | 第36-37页 |
| 2.2.14.5 动态交换容量考察 | 第37页 |
| 2.2.14.6 G418浓度与纯度的测定 | 第37-38页 |
| 第三章 绛红糖胺工程化探索 | 第38-46页 |
| 3.1 genM2基因功能的研究 | 第38-45页 |
| 3.1.1 重组质粒pDF803的构建 | 第38-41页 |
| 3.1.1.1 基因genM2同源交换臂的扩增 | 第38-40页 |
| 3.1.1.2 质粒pDF803的构建和验证 | 第40-41页 |
| 3.1.2 基因genM2阻断工程菌的构建 | 第41-44页 |
| 3.1.2.1 基因genM2失活单交换工程菌的构建 | 第41-43页 |
| 3.1.2.2 genM2阻断突变株的筛选 | 第43-44页 |
| 3.1.3 GKM2805发酵及及其代谢产物分析 | 第44-45页 |
| 3.2 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 绛红糖胺甲基化基因的查找探索 | 第46-53页 |
| 4.1 基因genW功能的研究 | 第46-52页 |
| 4.1.1 同源重组质粒pDF503的构建 | 第46-49页 |
| 4.1.1.1 扩增同源重组交换臂 | 第46-48页 |
| 4.1.1.2 重组质粒pDF504的构建与筛选 | 第48-49页 |
| 4.1.2 阻断菌株的筛选与验证 | 第49-51页 |
| 4.1.3 工程菌GW506发酵及其代谢产物分析 | 第51-52页 |
| 4.2 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 ermE基因替换genQ基因工程菌的构建 | 第53-61页 |
| 5.1 重组质粒pEHB12的构建 | 第53-57页 |
| 5.1.1 ermE基因及同源交换臂PCR扩增 | 第53-54页 |
| 5.1.2 重组质粒pEHB12的构建 | 第54-57页 |
| 5.2 突变株的筛选 | 第57-58页 |
| 5.2.1 单交换突变工程菌的鉴定 | 第57页 |
| 5.2.2 双交换突变株的筛选 | 第57-58页 |
| 5.3 工程菌GQ408次级代谢产物分析 | 第58-60页 |
| 5.4 小结 | 第60-61页 |
| 第六章 工程菌GQ175发酵优化及放大 | 第61-73页 |
| 6.1 菌种质量的考察 | 第61-62页 |
| 6.2 菌种发酵条件的研究 | 第62-67页 |
| 6.2.1 种子生长曲线和发酵水平曲线的测定 | 第62-63页 |
| 6.2.2 培养基碳源含量的确定 | 第63-64页 |
| 6.2.3 培养基主要氮源的确定 | 第64-65页 |
| 6.2.4 培养基无机盐的确定 | 第65页 |
| 6.2.5 最佳发酵配方组合的验证 | 第65-67页 |
| 6.3 G418的罐上发酵工艺的控制与优化 | 第67-72页 |
| 6.3.1 种龄的确定 | 第67页 |
| 6.3.2 接种量的确定 | 第67-68页 |
| 6.3.3 发酵过程控制及优化 | 第68-72页 |
| 6.4 小结 | 第72-73页 |
| 第七章 D152树脂分离纯化G418研究 | 第73-80页 |
| 7.1 D152型树脂脱色性能研究 | 第73页 |
| 7.2 D512树脂交换G418性能考察 | 第73-74页 |
| 7.3 D152离子交换树脂解吸工艺的研究 | 第74-78页 |
| 7.3.1 G418发酵滤液的检测分析 | 第75页 |
| 7.3.2 不同粒径D152树脂对分离纯化的影响 | 第75-76页 |
| 7.3.3 pH对解吸效果的影响 | 第76-77页 |
| 7.3.4 流速对分离纯化的影响 | 第77页 |
| 7.3.5 分离参数组合验证 | 第77-78页 |
| 7.4 小结 | 第78-80页 |
| 全文总结 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 附录 | 第86-89页 |
| 附1:工程菌GM2805，引物P7/P8 PGR产物测序结果 | 第86页 |
| 附2:工程菌GW506，引物P5/P6 PCR产物测序结果 | 第86-87页 |
| 附3:工程菌GQ408，引物P5/P6 PCR产物测序结果 | 第87-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |
