| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 课题背景 | 第10页 |
| 1.2 2,3-丁二醇的理化性质及其应用 | 第10-11页 |
| 1.3 2,3-丁二醇的生产方法 | 第11页 |
| 1.4 2,3-丁二醇的生产微生物 | 第11-12页 |
| 1.5 提高2,3-丁二醇的生产效益的方法 | 第12-13页 |
| 1.6 2,3-丁二醇的合成代谢途径 | 第13-14页 |
| 1.7 微生物中2,3-丁二醇异构体的形成机制 | 第14-16页 |
| 1.8 2,3-丁二醇脱氢酶 | 第16-19页 |
| 1.9 光学纯目标产物的生产 | 第19-22页 |
| 1.9.1 非宿主生产光学纯产物 | 第20页 |
| 1.9.2 同源宿主生产光学纯产物 | 第20-21页 |
| 1.9.3 异源宿主生产光学纯产物 | 第21-22页 |
| 1.10 本课题的研究内容和意义 | 第22-23页 |
| 1.10.1 研究内容 | 第22页 |
| 1.10.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 粘质沙雷氏菌MG1的2,3-丁二醇异构体形成途径 | 第23-41页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料和方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 菌株、质粒及引物 | 第25-26页 |
| 2.2.4 培养基及抗生素浓度 | 第26-27页 |
| 2.2.5 菌株的摇瓶发酵 | 第27页 |
| 2.2.6 提取粘质沙雷氏菌的基因组DNA | 第27页 |
| 2.2.7 DNA片段的溶液回收 | 第27页 |
| 2.2.8 线性质粒的切胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.10 热激转化方法 | 第28页 |
| 2.2.11 重组质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.12 2,3-丁二醇脱氢酶基因的克隆 | 第29页 |
| 2.2.13 2,3-丁二醇脱氢酶基因的BLAST | 第29页 |
| 2.2.14 2,3-丁二醇脱氢酶基因片段的克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.15 自杀载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.16 粘质沙雷氏菌与大肠杆菌的结合转移 | 第31页 |
| 2.2.17 缺失菌株的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.18 制备气相样品 | 第32页 |
| 2.2.19 样品检测方法及条件 | 第32页 |
| 2.2.20 建立定量2,3-丁二醇和乙偶姻的标准曲线 | 第32页 |
| 2.2.21 蔗糖浓度的测定 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第33-40页 |
| 2.3.1 粘质沙雷氏菌基因组的提取 | 第33页 |
| 2.3.2 2,3-丁二醇脱氢酶基因的克隆 | 第33-34页 |
| 2.3.3 2,3-丁二醇和乙偶姻的标准曲线 | 第34-35页 |
| 2.3.4 粘质沙雷氏菌MG1的发酵产物检测 | 第35-36页 |
| 2.3.5 2,3-丁二醇脱氢酶基因片段的扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.6 自杀载体的构建 | 第37页 |
| 2.3.7 粘质沙雷氏菌和大肠杆菌的结合转移 | 第37-38页 |
| 2.3.8 2,3-丁二醇脱氢酶基因缺失菌株的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.9 粘质沙雷氏菌MG1-slaCm的发酵产物检测 | 第39页 |
| 2.3.10 原始菌和工程菌的发酵结果比较 | 第39页 |
| 2.3.11 2,3-丁二醇异构体形成途径推断 | 第39-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 (2R,3R)-2,3-丁二醇生产菌株的构建 | 第41-50页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 材料和方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 实验仪器和试剂 | 第41页 |
| 3.2.2 实验所需的菌株、质粒和引物 | 第41-42页 |
| 3.2.3 获得粘质沙雷氏菌MG1的2,3-丁二醇脱氢酶基因的启动子序列 | 第42页 |
| 3.2.4 获得枯草芽孢杆菌的2,3-丁二醇脱氢酶基因序列 | 第42页 |
| 3.2.5 slaC基因的启动子序列的扩增 | 第42-43页 |
| 3.2.6 枯草芽孢杆菌的2,3-丁二醇脱氢酶基因的扩增 | 第43页 |
| 3.2.7 启动子序列和2,3-丁二醇脱氢酶基因的融合PCR | 第43-44页 |
| 3.2.8 构建表达载体 | 第44-45页 |
| 3.2.9 重组质粒的鉴定 | 第45页 |
| 3.2.10 粘质沙雷氏菌电转感受态的制备 | 第45-46页 |
| 3.2.11 粘质沙雷氏菌的电转化 | 第46页 |
| 3.2.12 重组菌的筛选 | 第46页 |
| 3.2.13 重组菌的摇瓶发酵 | 第46页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第46-49页 |
| 3.3.1 Pslac融合片段的扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第47页 |
| 3.3.3 启动子序列的分析 | 第47页 |
| 3.3.4 粘质沙雷氏菌工程菌的筛选 | 第47页 |
| 3.3.5 工程菌的摇瓶发酵 | 第47-48页 |
| 3.3.6 原始菌MG1和工程菌MG1-slaCm-dBDH的发酵结果对比 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 总结与展望 | 第50-52页 |
| 4.1 总结 | 第50页 |
| 4.2 展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
