| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 综述 | 第10-24页 |
| 1 真菌耐药机制的概述 | 第10-13页 |
| 1.1 真菌病的现状 | 第10页 |
| 1.2 抗真菌药物研究现状 | 第10-12页 |
| 1.2.1 多烯类抗生素类 | 第11页 |
| 1.2.2 三唑类药物 | 第11页 |
| 1.2.3 棘白素类药物 | 第11页 |
| 1.2.4 烯丙胺类 | 第11页 |
| 1.2.5 核苷类药物 | 第11-12页 |
| 1.2.6 其他新型抗真菌药 | 第12页 |
| 1.3 真菌耐药机理的概述 | 第12-13页 |
| 1.3.1 激活药物外排泵,使药物在细胞内的积累量减少 | 第12-13页 |
| 1.3.2 改变靶位点的成分,降低药物对靶位点的损伤 | 第13页 |
| 1.3.3 调节细胞内逆境应答机制来平衡药物影响 | 第13页 |
| 2 钙信号通路的概述 | 第13-21页 |
| 2.1 钙离子的概述 | 第13-14页 |
| 2.2 钙离子的调节 | 第14-16页 |
| 2.3 钙通道蛋白 | 第16-21页 |
| 2.3.1 钙离子结合蛋白CAM | 第16-18页 |
| 2.3.2 钙离子通道蛋白MidA和CchA | 第18-19页 |
| 2.3.3 CnaA概述 | 第19-20页 |
| 2.3.4 CnaA的转录因子CrzA | 第20-21页 |
| 3 真菌联合用药的研究进展 | 第21页 |
| 4 模式生物烟曲霉(Aspergillus fumigatus) | 第21-22页 |
| 5 本课题的研究内容、思路及方法 | 第22-24页 |
| 5.1 研究内容 | 第22-23页 |
| 5.2 研究思路及方法 | 第23-24页 |
| 第二章 钙信号系统对烟曲霉唑类药物耐受性的调节机制研究 | 第24-33页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 1.1 菌种及培养条件 | 第24-25页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第25页 |
| 1.3 所用药物的配制 | 第25页 |
| 1.4 主要仪器设备及来源 | 第25页 |
| 1.5 方法 | 第25-27页 |
| 1.5.1 在液体培养条件下测试AF293对唑类药物与FK506或EGTA联合使用时的效果 | 第25页 |
| 1.5.2 E-test试纸条测试烟曲霉对于唑类药物的抑菌浓度 | 第25-26页 |
| 1.5.3 用流式细胞仪测定Rh123的积累量 | 第26页 |
| 1.5.4 药物外排泵活力的检测 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-32页 |
| 2.1 液体条件下AF293菌株在加入EGTA或FK506后对唑类药物的敏感性 | 第27-28页 |
| 2.2 菌丝生长长度的量化 | 第28页 |
| 2.3 E-test试纸条测定菌株对唑类药物最低抑菌值 | 第28-29页 |
| 2.4 测试加入EGTA后,胞内Rh 123的积累量 | 第29-31页 |
| 2.5 EGTA影响了孢内Rh123的吸收 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 烟曲霉耐药菌菌株(Gra04)的耐药机制探究 | 第33-44页 |
| 1 材料与方法 | 第33-38页 |
| 1.1 菌种及培养条件 | 第33-34页 |
| 1.2 所用试剂及药物 | 第34页 |
| 1.3 主要仪器设备及来源 | 第34页 |
| 1.4 方法 | 第34-38页 |
| 1.4.1 流式细胞仪测积累量 | 第34页 |
| 1.4.2 烟曲霉麦角固醇的提取 | 第34-35页 |
| 1.4.3 引物的设计 | 第35-36页 |
| 1.4.4 融合PCR | 第36页 |
| 1.4.5 三段产物的Fusion PCR连接 | 第36-37页 |
| 1.4.6 大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| 1.4.7 大肠杆菌质粒的提取 | 第37页 |
| 1.4.8 原生质体的制备与转化 | 第37-38页 |
| 1.4.9 转化子的验证 | 第38页 |
| 1.4.10 野生型Cox10基因转到耐药菌Gra04中 | 第38页 |
| 2 实验结果 | 第38-42页 |
| 2.1 耐药菌麦角固醇含量的检测 | 第38-39页 |
| 2.2 耐药菌Gra04药泵活力的检测 | 第39-40页 |
| 2.3 全基因测序分析 | 第40-41页 |
| 2.4 AfCox10基因的敲除研究 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 烟曲霉耐药株的治疗对策探索 | 第44-59页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第45页 |
| 1.2 所用试剂 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 1.4 方法 | 第45-48页 |
| 1.4.1 E-test检测 | 第45页 |
| 1.4.2 纳米银杀灭烟曲霉方法 | 第45页 |
| 1.4.3 小鼠尾静脉注射纳米银方法如下 | 第45-46页 |
| 1.4.4 眼球取血和分离血清 | 第46页 |
| 1.4.5 小鼠急性毒性实验 | 第46-47页 |
| 1.4.6 小鼠血清检测指标 | 第47页 |
| 1.4.7 溶血试验浓度选择 | 第47页 |
| 1.4.8 新鲜稀释抗凝兔血的制备 | 第47页 |
| 1.4.9 血凝试验方法 | 第47-48页 |
| 2 实验结果 | 第48-57页 |
| 2.1 唑类药物和EGTA或FK506的联合使用对耐药菌株AfGra04的影响 | 第48-50页 |
| 2.2 纳米银对烟曲霉杀菌的效果 | 第50页 |
| 2.3 纳米银杀灭烟曲霉机理的探究 | 第50-51页 |
| 2.4 纳米银毒性的测试 | 第51-57页 |
| 2.4.1 对小鼠的体重 | 第51-52页 |
| 2.4.2 小鼠脏器重量的检测 | 第52-53页 |
| 2.4.3 小鼠的生化指标检测 | 第53-54页 |
| 2.4.4 器官切片观察 | 第54-56页 |
| 2.4.5 溶血试验 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
