| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 第一部分 基于iTRAQ技术的糖尿病大鼠肝组织的蛋白组学研究 | 第17-36页 |
| 1 材料 | 第17页 |
| 1.1 实验动物 | 第17页 |
| 1.2 实验药物 | 第17页 |
| 1.3 主要试剂与仪器 | 第17页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第17页 |
| 2 研究方法 | 第17-20页 |
| 2.1 动物模型制备 | 第17-18页 |
| 2.2 动物分组和干预 | 第18页 |
| 2.3 动物取材 | 第18页 |
| 2.4 iTRAQ检测肝组织蛋白质组学 | 第18-19页 |
| 2.5 生物信息分析 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-28页 |
| 3.1. 质谱基本鉴定信息和质量评估 | 第20-22页 |
| 3.2 COG分类图注释 | 第22-25页 |
| 3.3 GO注释 | 第25-26页 |
| 3.4 肝脏组织差异蛋白质的筛选 | 第26-27页 |
| 3.5 Pathway代谢通路注释 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-35页 |
| 4.1 iTRAQ蛋白质组学 | 第28-30页 |
| 4.2 GO注释 | 第30-31页 |
| 4.3 肝脏组织差异蛋白质 | 第31-33页 |
| 4.4 Pathway信号通路富集分析 | 第33-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第二部分 石斛合剂改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗抑制糖异生的机制研究 | 第36-62页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 1.1 实验动物 | 第36页 |
| 1.2 实验药物 | 第36页 |
| 1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 1.4 主要仪器 | 第36-37页 |
| 1.5 主要试剂的配制 | 第37页 |
| 2 研究方法 | 第37-45页 |
| 2.1 糖尿病大鼠模型的制备 | 第37页 |
| 2.2 动物分组及干预 | 第37-38页 |
| 2.3 动物取材 | 第38页 |
| 2.4 整体糖脂代谢指标测定 | 第38页 |
| 2.5 ELISA法检测各组空腹胰岛素、胰高血糖素 | 第38页 |
| 2.6 肝脏组织病理学观察 | 第38-39页 |
| 2.7 免疫组化检测PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相关蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 2.8 RT-PCR法检测PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相关基因的mRNA表达情况 | 第40-42页 |
| 2.9 Western bolt检测各组PI3K/Akt和GCGR/PKA通路相关蛋白表达 | 第42-45页 |
| 2.10 统计学分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-54页 |
| 3.1 动物一般状况 | 第45页 |
| 3.2 各组大鼠血清学指标的变化 | 第45-48页 |
| 3.3 各组大鼠肝组织HE染色结果 | 第48-49页 |
| 3.4 石斛合剂对糖尿病大鼠GCGR/PKA和PI3K/AKT通路相关基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 石斛合剂对大鼠肝组织PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相关蛋白表达的影响 | 第50-54页 |
| 4 讨论 | 第54-61页 |
| 4.1 糖尿病大鼠模型的构建 | 第54页 |
| 4.2 干预药物石斛合剂和阳性对照药的选择依据 | 第54-56页 |
| 4.3 石斛合剂对糖尿病模型大鼠糖脂代谢和肝功能的影响 | 第56-58页 |
| 4.4 石斛合剂对糖尿病模型大鼠肝脏形态学的影响 | 第58-59页 |
| 4.5 石斛合剂对GCGR/PKA信号通路的影响 | 第59-60页 |
| 4.6 石斛合剂通过调控P13K/Akt信号通路影响糖异生 | 第60-61页 |
| 4.7 石斛合剂对糖异生关键限速酶PEPCK和G6Pase的影响 | 第61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 第三部分 石斛合剂对胰岛素抵抗肝细胞糖异生的的作用及其机制 | 第62-81页 |
| 1 材料 | 第62-64页 |
| 1.1 细胞 | 第62页 |
| 1.2 药物 | 第62页 |
| 1.3 主要试剂和耗材 | 第62页 |
| 1.4 主要仪器 | 第62-63页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第63-64页 |
| 2 研究方法 | 第64-68页 |
| 2.1 细胞培养、传代与冻存 | 第64页 |
| 2.2 石斛合剂含药血清及空白血清制备 | 第64-65页 |
| 2.3 MTT法筛选石斛合剂含药血清浓度 | 第65页 |
| 2.4 筛选胰岛素的干预浓度 | 第65-66页 |
| 2.5 筛选建立IR肝细胞模型的造模胰岛素浓度 | 第66页 |
| 2.6 高胰岛素诱导L02肝细胞胰岛素抵抗模型的建立和鉴定 | 第66页 |
| 2.7 实验分组及干预 | 第66页 |
| 2.8 各组肝细胞糖消耗量的变化 | 第66-67页 |
| 2.9 Realtime PCR检测各组的InsR、GluR、FoxO1、PEPCK和G6Pase的mRNA表达 | 第67页 |
| 2.10 Western-blotting实验检测PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相关蛋白的表达 | 第67-68页 |
| 2.11 加入PI3K抑制剂后检测PI3K/AKT通路相关蛋白表达的影响 | 第68页 |
| 2.12 统计学处理实验数据 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-76页 |
| 3.1 MTT法确定石斛合剂含药血清浓度 | 第68-69页 |
| 3.2 有效胰岛素干预浓度的筛选 | 第69-70页 |
| 3.3 建立IR肝细胞模型的胰岛素浓度筛选 | 第70-71页 |
| 3.4 L02细胞IR模型的鉴定 | 第71-72页 |
| 3.5石斛合剂含药血清对IR肝细胞糖消耗量的影响 | 第72页 |
| 3.6 石斛合剂对各组肝细胞InsR、FoxO1、PEPCK、G6Pase和GCGR的mRNA表达的影响 | 第72-74页 |
| 3.7 石斛合剂对各组肝细胞PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相关蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| 3.8 加入PI3K抑制剂后石斛合剂对IR肝细胞PI3K/AKT通路相关蛋白表达的影响 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| 4.1 肝胰岛素抵抗对糖尿病的影响 | 第76页 |
| 4.2 IR细胞模型构建 | 第76-77页 |
| 4.3 石斛合剂治疗糖尿病的中药活性成分以及中药含药血清法的应用 | 第77-78页 |
| 4.4 石斛合剂对IR肝细胞的糖消耗试验的影响 | 第78页 |
| 4.5 石斛合剂通过P13K/Akt信号通路对糖异生的影响 | 第78-79页 |
| 4.6 石斛合剂通过GCGR/PKA信号通路对糖异生的影响 | 第79页 |
| 4.7 加入PI3K抑制剂后石斛合剂通过P13K/Akt信号通路对糖异生的影响 | 第79-80页 |
| 5 小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 文献综述1 胰高血糖素信号通路与糖尿病肝糖异生的研宄进展 | 第89-96页 |
| 参考文献 | 第93-96页 |
| 文献综述2 中药活性成分防治糖尿病的研究进展 | 第96-103页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104-105页 |
