| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 多能干细胞概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 多能干细胞的定义和分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞在其它物种研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 猪胚胎干细胞的研究价值和应用前景 | 第15-17页 |
| 1.2.1 概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 建系影响因素 | 第16-17页 |
| 1.3 多能干细胞调控通路 | 第17-22页 |
| 1.3.1 多能干细胞状态分级 | 第17-19页 |
| 1.3.2 多能干细胞依赖的信号通路 | 第19-21页 |
| 1.3.3 猪多能干细胞多能性和信号通路特殊性 | 第21-22页 |
| 1.4 猪多能干细胞鉴定标准及现状 | 第22-23页 |
| 1.5 成分明确的无血清培养基 | 第23页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 实验动物和材料 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.1.4 常用试剂和配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 猪体外受精胚胎获得 | 第28-29页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2.3 慢病毒包装 | 第30-31页 |
| 2.2.4 多能性鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.5 多能干细胞基因编辑 | 第33-34页 |
| 2.2.6 猪体细胞核移植和重构胚发育统计 | 第34页 |
| 2.2.7 嵌合体制各 | 第34页 |
| 2.2.8 嵌合体验证 | 第34-35页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-56页 |
| 3.1 从体外受精胚胎中分离培养获得猪多能干细胞系 | 第36-38页 |
| 3.1.1 氧气浓度对猪多能干细胞建系效率的影响 | 第36页 |
| 3.1.2 细胞培养液对猪多能干细胞建系效率的影响 | 第36-37页 |
| 3.1.3 胚龄对猪多能干细胞建系效率的影响 | 第37-38页 |
| 3.1.4 从猪体外受精胚胎中分离培养获得猪多能干细胞系 | 第38页 |
| 3.2 PPSCs特性鉴定 | 第38-43页 |
| 3.2.1 pPSCs特性鉴定 | 第38-41页 |
| 3.2.2 pPSCs依赖的信号通路 | 第41页 |
| 3.2.3 pPSCs拟胚体形成及自发分化 | 第41-42页 |
| 3.2.4 pPSCs畸胎瘤形成能力 | 第42-43页 |
| 3.3 pPSCs潜在应用价值 | 第43-47页 |
| 3.3.1 pPSCs基因编辑操作及多能性验证 | 第43-44页 |
| 3.3.2 pPSC-FDs用作核移植供体细胞 | 第44-45页 |
| 3.3.3 pPSC-FDs嵌合体制备及嵌合能力验证 | 第45-47页 |
| 3.4 无血清条件下培养获得猪多能干细胞系 | 第47-50页 |
| 3.4.1 无血清培养基的筛选 | 第47-48页 |
| 3.4.2 无血清培养基中基础培养液对猪多能干细胞建系效率的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.3 无血清条件下分离培养获得猪多能干细胞系(pPSC-KOs) | 第49-50页 |
| 3.5 pPSC-KOs特性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.6 pPSC-KOs分化能力和发育能力 | 第51-56页 |
| 3.6.1 拟胚体形成和自发分化 | 第51-53页 |
| 3.6.2 神经诱导分化和成骨诱导分化 | 第53页 |
| 3.6.3 转基因操作及用于体细胞核移植操作 | 第53-55页 |
| 3.6.4 嵌合能力验证 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 猪多能干细胞系的建立 | 第56页 |
| 4.2 猪多能干细胞所依赖信号通路的特异性 | 第56-57页 |
| 4.3 猪多能干细胞的转基因操作和应用 | 第57页 |
| 4.4 猪多能干细胞的嵌合能力 | 第57-58页 |
| 4.5 培养环境决定细胞特性 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
