| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 帕金森病及其病理学特征 | 第10页 |
| 1.2 α-突触核蛋白 (α-Syn) | 第10-12页 |
| 1.2.1 α-Syn的分子结构特征 | 第10-11页 |
| 1.2.2 α-Syn的聚集与路易包涵体的形成 | 第11-12页 |
| 1.2.3 α-Syn与氧化应激 | 第12页 |
| 1.3 α-Syn的蛋白质翻译后修饰——SUMO化和泛素化修饰 | 第12-15页 |
| 1.3.1 α-Syn的苏素化修饰 (SUMOylation) | 第13-14页 |
| 1.3.2 α-Syn的泛素化修饰 (ubiquitination) | 第14-15页 |
| 1.4 α-Syn的降解通路 | 第15-18页 |
| 1.4.1 自噬溶酶体途径 (ALP) | 第16页 |
| 1.4.2 泛素介导的蛋白酶体降解系统 (UPS) | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 构建 α-Syn突变型和Flag-Ubiquitin野生型及突变型重组质粒质粒 | 第18-24页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第18页 |
| 2.1.2 常用试剂及配制 | 第18-20页 |
| 2.1.3 实验步骤 | 第20-24页 |
| 2.2 突变体 α-Syn G51D和Flag-Ubiquitin野生型和突变型重组载体的表达与稳转细胞系的建立 | 第24-29页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2.2 常用试剂及配制 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验步骤 | 第26-29页 |
| 2.3 免疫荧光标记和细胞活性、凋亡检测 | 第29-32页 |
| 2.3.1 实验仪器与设备 | 第29页 |
| 2.3.2 常用试剂及配制 | 第29-30页 |
| 2.3.3 实验步骤 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-50页 |
| 3.1 突变型 α-Syn G51D和野生型及突变型Flag-Ubiquitin重组质粒的构建以及在B103细胞内的表达 | 第32-34页 |
| 3.1.1 重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.2 重组质粒在B103细胞内的表达检测 | 第33-34页 |
| 3.2 重组质粒 α-Syn、Flag-Ubiquitin野生型及其突变型在细胞内的分布和对细胞存活的影响 | 第34-38页 |
| 3.2.1 α-Syn野生型及其突变体在B103细胞内的分布及细胞毒性检测 | 第34-36页 |
| 3.2.2 Flag-Ubiquitin野生型及其突变体细胞内的分布及细胞毒性检测 | 第36-38页 |
| 3.3 重组质粒 α-Syn稳转细胞系的建立 | 第38-40页 |
| 3.3.1 重组质粒 α-Syn稳转细胞系的筛选 | 第38-39页 |
| 3.3.2 重组质粒Flag-Ubiquitin在稳转细胞系内的表达 | 第39-40页 |
| 3.4 重组质粒Flag-Ubiquitin在稳转细胞内对 α-synuclein的影响 | 第40-45页 |
| 3.4.1 B103细胞内，重组质粒Flag-Ubiquitin与 26S蛋白酶体定位结合 | 第40-41页 |
| 3.4.2 稳转细胞内，重组质粒Flag-Ubiquitin与 26S蛋白酶体定位结合 | 第41页 |
| 3.4.3 B103细胞内，重组质粒Flag-Ubiquitin与内源性Ubiquitin的分布 | 第41-43页 |
| 3.4.4 α-Syn与Ubiquitin的定位结合情况 | 第43页 |
| 3.4.5 α-Syn与 26S蛋白酶体的定位结合情况 | 第43-45页 |
| 3.5 SUMO在稳转细胞内对 α-Syn的影响 | 第45-50页 |
| 3.5.1 SUMO与 α-Syn的定位结合情况 | 第45-46页 |
| 3.5.2 在稳转细胞内，Flag-Ubiquitin与SUMO的相互作用 | 第46-50页 |
| 4 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
