| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 植物DIR蛋白的结构、表达及功能 | 第13-21页 |
| 1.1.1 DIR蛋白家族的分类和结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 DIR的表达特性 | 第14-16页 |
| 1.1.3 DIR基因及蛋白的表达定位 | 第16-17页 |
| 1.1.4 DIR的生物学功能 | 第17-21页 |
| 1.2 木质素和木脂素的生物合成及功能 | 第21-22页 |
| 1.3 三七根腐病 | 第22-23页 |
| 1.4 本课题的研究意义及目的 | 第23-25页 |
| 第二章 三七DIR蛋白基因家族的克隆与表达特性分析 | 第25-51页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第26页 |
| 2.3 方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 病原真菌的活化 | 第26页 |
| 2.3.2 茄腐镰刀菌接种以及四种信号分子处理三七 | 第26-27页 |
| 2.3.3 RNA的提取及mRNA的分离 | 第27-29页 |
| 2.3.4 RACE cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.3.5 5′RACE及3′RACE | 第30-31页 |
| 2.3.6 T-A克隆 | 第31页 |
| 2.3.7 全长cDNA的克隆及生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.3.8 qRT-PCR | 第32-34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-46页 |
| 2.4.1 三七Dirigent蛋白基因家族全长cDNA的克隆 | 第34-39页 |
| 2.4.2 三七DIR蛋白与多种植物DIR蛋白构建系统进化树 | 第39-40页 |
| 2.4.3 二级结构分析 | 第40-41页 |
| 2.4.4 3D结构分析 | 第41-42页 |
| 2.4.5 三七DIR基因家族的表达谱分析 | 第42-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-51页 |
| 第三章 PnDIR1的原核表达及抑菌活性分析 | 第51-63页 |
| 3.1 前言 | 第51页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第51-53页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第51-52页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.3 缓冲液和培养基配方 | 第53页 |
| 3.3 方法 | 第53-56页 |
| 3.3.1 PnDIR1的扩增 | 第53-54页 |
| 3.3.2 原核表达载体的构建并转化 | 第54-55页 |
| 3.3.3 His-PnDIR1融合蛋白的诱导表达 | 第55页 |
| 3.3.4 外源蛋白的提取和纯化 | 第55页 |
| 3.3.5 外源蛋白抑菌活性的测定 | 第55-56页 |
| 3.4 结果与分析 | 第56-60页 |
| 3.4.1 PnDIR1原核表达载体的构建及转化 | 第56页 |
| 3.4.2 PnDIR1的诱导表达 | 第56-58页 |
| 3.4.3 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 3.4.4 重组蛋白的抑菌活性分析 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 PnDIR1的亚细胞定位 | 第63-71页 |
| 4.1 前言 | 第63页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第63-65页 |
| 4.2.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 4.2.3 缓冲液和培养基配方 | 第65页 |
| 4.3 方法 | 第65-66页 |
| 4.3.1 亚细胞定位载体的构建 | 第65页 |
| 4.3.2 亚细胞定位载体转化根癌农杆菌 | 第65-66页 |
| 4.3.3 PnDIR1-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第66页 |
| 4.4 结果与分析 | 第66-68页 |
| 4.4.1 亚细胞定位载体的构建并转化根癌农杆菌 | 第66-67页 |
| 4.4.2 PnDIR1-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第67-68页 |
| 4.5 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 PnDIR1的功能验证 | 第71-87页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第71-73页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第71页 |
| 5.2.2 菌株和载体 | 第71-72页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第72页 |
| 5.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第72-73页 |
| 5.3 方法 | 第73-77页 |
| 5.3.1 植物超表达载体的构建 | 第73页 |
| 5.3.2 农杆菌介导的烟草遗传转化并阳性筛选 | 第73-74页 |
| 5.3.3 qRT-PCR | 第74-75页 |
| 5.3.4 转基因烟草中木质素含量的测定 | 第75-76页 |
| 5.3.5 转基因烟草抗病性分析 | 第76-77页 |
| 5.4 结果与分析 | 第77-83页 |
| 5.4.1 PnDIR1植物超表达载体的构建 | 第77页 |
| 5.4.2 PnDIR1转基因烟草的产生和筛选 | 第77-78页 |
| 5.4.3 qRT-PCR | 第78-81页 |
| 5.4.4 转基因烟草的木质素含量 | 第81页 |
| 5.4.5 转基因烟草对茄腐镰刀菌的抗性分析 | 第81-83页 |
| 5.5 讨论 | 第83-87页 |
| 第六章 结论与展望 | 第87-91页 |
| 6.1 结论 | 第87-88页 |
| 6.2 展望 | 第88-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文目录 | 第103页 |
| 申请专利 | 第103-105页 |
