| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 环境中PAHs污染 | 第9-10页 |
| 1.2 PAHs污染的微生物修复 | 第10-12页 |
| 1.3 PAHs降解过程中的关键酶及其基因 | 第12-13页 |
| 1.3.1 PAHs降解酶 | 第12页 |
| 1.3.2 PAHs降解基因 | 第12-13页 |
| 1.4 本论文研究工作 | 第13-14页 |
| 1.4.1 研究目的及意义 | 第13-14页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第14页 |
| 1.5 技术路线 | 第14-15页 |
| 1.6 创新点 | 第15-16页 |
| 第2章 B. cereus对芘的降解特性 | 第16-27页 |
| 2.1 材料与设备 | 第16-17页 |
| 2.1.1 实验菌种 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 培养基 | 第16页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 菌悬液的配制 | 第17页 |
| 2.2.2 无机盐培养基成分对菌体降解芘的影响 | 第17页 |
| 2.2.3 不同降解体系对菌体降解芘的影响 | 第17-18页 |
| 2.2.4 芘及其代谢产物的降解、萃取、检测方法 | 第18-19页 |
| 2.2.5 菌体粗酶液的制备 | 第19页 |
| 2.2.6 关键酶活性测定 | 第19-20页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第20-26页 |
| 2.3.1 无机盐培养基成分对菌体降解芘的影响 | 第20-21页 |
| 2.3.2 不同降解体系对菌体降解芘的影响 | 第21-22页 |
| 2.3.3 时间对B. cereus降解芘的影响 | 第22页 |
| 2.3.4 B. cereus降解芘的代谢产物分析 | 第22-23页 |
| 2.3.5 B. cereus对4种单羟基多环芳烃的分解利用 | 第23-24页 |
| 2.3.6 B. cereus降解芘关键酶的活性分析 | 第24-26页 |
| 2.4 本章小结 | 第26-27页 |
| 第3章 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因的克隆及序列分析 | 第27-39页 |
| 3.1 材料与设备 | 第27-28页 |
| 3.1.1 实验菌种 | 第27页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第27页 |
| 3.1.3 培养基 | 第27-28页 |
| 3.1.4 实验设备 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 3.2.1 菌株DNA提取 | 第28页 |
| 3.2.2 PCR引物设计 | 第28页 |
| 3.2.3 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因的扩增 | 第28-29页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29页 |
| 3.2.5 PCR产物纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.6 PCR产物克隆和测序 | 第30-31页 |
| 3.2.7 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因序列分析 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-38页 |
| 3.3.1 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因的扩增 | 第32-33页 |
| 3.3.2 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.3 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因的序列测定与分析 | 第34-37页 |
| 3.3.4 系统发育树构建 | 第37-38页 |
| 3.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第4章 邻苯二酚 2,3-双加氧酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第39-50页 |
| 4.1 材料与设备 | 第39-40页 |
| 4.1.1 实验菌种 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.3 培养基 | 第40页 |
| 4.1.4 实验设备 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第41页 |
| 4.2.3 重组蛋白的定量检测 | 第41-42页 |
| 4.2.4 重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第42-43页 |
| 4.2.5 重组蛋白的质谱鉴定 | 第43页 |
| 4.2.6 重组菌株C23O酶活检测 | 第43页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第43-48页 |
| 4.3.1 C23O基因表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.3.2 重组表达载体的筛选及鉴定 | 第44-46页 |
| 4.3.3 重组蛋白的定量检测 | 第46-47页 |
| 4.3.4 重组菌株的全细胞蛋白电泳检测 | 第47-48页 |
| 4.3.5 蛋白质谱分析 | 第48页 |
| 4.3.6 重组菌株C23O酶活检测 | 第48页 |
| 4.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第5章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
