| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 L-苏氨酸概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 L-苏氨酸的理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 L-苏氨酸的用途 | 第8页 |
| 1.1.3 L-苏氨酸的工业生产 | 第8-9页 |
| 1.2 L-苏氨酸在大肠杆菌中的生物合成及其代谢工程 | 第9-11页 |
| 1.2.1 L-苏氨酸的生物合成途径 | 第9-10页 |
| 1.2.2 L-苏氨酸的代谢改造策略 | 第10-11页 |
| 1.3 乙醛酸循环 | 第11-12页 |
| 1.3.1 乙醛酸循环概述 | 第11-12页 |
| 1.3.2 乙醛酸循环用于L-苏氨酸生产 | 第12页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第12页 |
| 1.5 研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第14-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 实验主要引物 | 第15-17页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要试剂和工具酶 | 第18页 |
| 2.1.5 培养基和菌株的培养条件 | 第18-19页 |
| 2.1.6 菌体培养和发酵 | 第19页 |
| 2.2 分子实验操作 | 第19-26页 |
| 2.2.1 基因组及质粒的提取方法 | 第19页 |
| 2.2.2 PCR体系 | 第19-20页 |
| 2.2.3 酶切与连接反应体系 | 第20页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.5 表达质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 敲入与敲除菌株的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.7 发酵参数的测定 | 第24页 |
| 2.2.8 基因转录水平分析 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-42页 |
| 3.1 增加草酰乙酸对L-苏氨酸产量的影响 | 第26-32页 |
| 3.1.1 过表达PEPC使TWF001的L-苏氨酸产量降低 | 第26-27页 |
| 3.1.2 强启动子替换加强乙醛酸循环 | 第27-29页 |
| 3.1.3 敲除iclR加强乙醛酸循环 | 第29-30页 |
| 3.1.4 强启动子替换与敲除iclR共同加强乙醛酸循环 | 第30-31页 |
| 3.1.5 乙醛酸循环改造对L-苏氨酸合成相关基因的转录水平影响分析 | 第31-32页 |
| 3.2 过表达AspC对L-苏氨酸发酵的影响 | 第32-36页 |
| 3.2.1 在TWF003中加强AspC | 第32-34页 |
| 3.2.2 在TWF004中加强AspC | 第34-35页 |
| 3.2.3 加强AspC后相关基因的转录水平分析 | 第35-36页 |
| 3.3 过表达thrA*BC对L-苏氨酸发酵的影响 | 第36-39页 |
| 3.3.1 构建质粒pFW01-thrA*BC | 第36-37页 |
| 3.3.2 过表达thrA*BC对L-苏氨酸发酵的影响 | 第37-39页 |
| 3.4 强化ASD及L-苏氨酸分泌途径 | 第39-41页 |
| 3.4.1 构建thrA*BC操纵子与asd、rhtA、rhtC、thrE的串联表达质粒 | 第39-40页 |
| 3.4.2 TWF006各过表达菌株的发酵情况 | 第40-41页 |
| 3.5 TWF006/pFW01-thrA*BC-asd分批补料发酵 | 第41-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
