| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 缩略词 | 第8-13页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 吩噻嗪类药物简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 理化性质 | 第13页 |
| 1.1.2 体内代谢 | 第13-14页 |
| 1.1.3 毒理作用 | 第14页 |
| 1.1.4 残留危害 | 第14-15页 |
| 1.2 吩噻嗪类药物残留检测方法 | 第15-17页 |
| 1.2.1 高效液相色谱法(HPLC) | 第15页 |
| 1.2.2 气相色谱-质谱联用法(GC/MS) | 第15页 |
| 1.2.3 液相色谱-质谱联用法(LC-MS) | 第15-16页 |
| 1.2.4 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第16-17页 |
| 1.3 新型抗体概述 | 第17-21页 |
| 1.3.1 嵌合抗体(Chimeric antibody) | 第17页 |
| 1.3.2 人源化抗体(Humanized antibody) | 第17页 |
| 1.3.3 核酸适配体(Aptamer) | 第17-18页 |
| 1.3.4 分子印迹聚合物(Molecularly imprinted polymer,MIP) | 第18页 |
| 1.3.5 受体(Receptor) | 第18-19页 |
| 1.3.6 Fab片段(Antigen Binding Fragment) | 第19页 |
| 1.3.7 单域抗体(Single domain antibody,dsAb) | 第19-20页 |
| 1.3.8 双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb) | 第20页 |
| 1.3.9 单链抗体(single-chain antibody) | 第20-21页 |
| 1.4 计算机模拟技术 | 第21-23页 |
| 1.4.1 抗体空间结构预测 | 第21-22页 |
| 1.4.2 分子对接 | 第22页 |
| 1.4.3 计算模拟应用 | 第22-23页 |
| 1.5 抗体体外进化 | 第23-26页 |
| 1.5.1 错误倾向PCR技术 | 第23-24页 |
| 1.5.2 突变株技术 | 第24页 |
| 1.5.3 DNA改组技术 | 第24页 |
| 1.5.4 链置换技术 | 第24-25页 |
| 1.5.5 定点突变技术 | 第25-26页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 试验材料 | 第27-29页 |
| 2.1 药品与试剂 | 第27页 |
| 2.2 设备仪器 | 第27页 |
| 2.3 生物信息数据库及软件 | 第27-28页 |
| 2.4 所用溶液 | 第28-29页 |
| 3 试验方法 | 第29-40页 |
| 3.1 吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体的制备 | 第29-32页 |
| 3.1.1 半抗原的合成 | 第29-30页 |
| 3.1.2 完全抗原的合成 | 第30页 |
| 3.1.3 单克隆抗体的制备 | 第30-31页 |
| 3.1.4 制备杂交瘤细胞 | 第31-32页 |
| 3.1.5 获取小鼠腹水 | 第32页 |
| 3.1.6 单抗纯化 | 第32页 |
| 3.1.7 单克隆抗体特异性检测 | 第32页 |
| 3.2 单链抗体的制备 | 第32-36页 |
| 3.2.1 合成引物 | 第32-33页 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞的复苏 | 第33页 |
| 3.2.3 总RNA的提取及反转录 | 第33-34页 |
| 3.2.4 VH/VL链的扩增和纯化 | 第34页 |
| 3.2.5 ScFv基因的拼接和纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.6 酶切载体及基因 | 第35页 |
| 3.2.7 目的片段与表达载体的连接及转化 | 第35页 |
| 3.2.8 单链抗体的原核表达 | 第35-36页 |
| 3.2.9 单链抗体蛋白纯化 | 第36页 |
| 3.2.10 Western blot检测 | 第36页 |
| 3.2.11 单链抗体的特异性检测 | 第36页 |
| 3.3 计算模拟与分子对接 | 第36-37页 |
| 3.3.1 序列分析 | 第36页 |
| 3.3.2 同源建模 | 第36-37页 |
| 3.3.3 分子对接 | 第37页 |
| 3.3.4 构建突变体模型 | 第37页 |
| 3.3.5 突变体分子对接 | 第37页 |
| 3.4 单链抗体突变体的制备 | 第37-40页 |
| 3.4.1 合成引物 | 第37-38页 |
| 3.4.2 定点突变 | 第38页 |
| 3.4.3 质粒转化 | 第38页 |
| 3.4.4 突变体诱导表达 | 第38页 |
| 3.4.5 突变体Western blot检测 | 第38页 |
| 3.4.6 突变体特异性检测 | 第38页 |
| 3.4.7 样品检测 | 第38-40页 |
| 4 结果分析 | 第40-58页 |
| 4.1 单克隆抗体的制备 | 第40-43页 |
| 4.1.1 半抗原以及完全抗原 | 第40-41页 |
| 4.1.2 血清效价及特异性 | 第41页 |
| 4.1.3 杂交瘤细胞株的筛选 | 第41-42页 |
| 4.1.4 单克隆抗体的特异性和灵敏度 | 第42-43页 |
| 4.2 单链抗体的制备 | 第43-47页 |
| 4.2.1 总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 4.2.2 重链和轻链基因 | 第44页 |
| 4.2.3 ScFv的产物鉴定 | 第44页 |
| 4.2.4 ScFv的诱导表达 | 第44-45页 |
| 4.2.5 ScFv的蛋白纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.6 单链抗体的特异性 | 第46-47页 |
| 4.3 计算模拟及分子对接 | 第47-55页 |
| 4.3.1 序列分析 | 第47页 |
| 4.3.2 同源建模 | 第47-50页 |
| 4.3.3 分子对接及结果分析 | 第50-52页 |
| 4.3.4 突变体模型及结构评估 | 第52-53页 |
| 4.3.5 分子对接结果 | 第53-55页 |
| 4.4 单链抗体突变体 | 第55-58页 |
| 4.4.1 定点突变 | 第55页 |
| 4.4.2 突变体诱导表达 | 第55页 |
| 4.4.3 突变体蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 4.4.4 突变体特异性检测 | 第56-57页 |
| 4.4.5 样品检测 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-62页 |
| 5.1 半抗原的选择 | 第58页 |
| 5.2 单链抗体的制备方法 | 第58-59页 |
| 5.3 计算机模拟及分子对接 | 第59-60页 |
| 5.3.1 同源模拟及评价 | 第59页 |
| 5.3.2 分子对接分析 | 第59-60页 |
| 5.4 单链抗体突变体 | 第60-61页 |
| 5.5 展望 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-63页 |
| 6.1 制备了吩噻嗪类药物的广谱单克隆抗体 | 第62页 |
| 6.2 制备了吩噻嗪类药物的广谱单链抗体 | 第62页 |
| 6.3 研究了单链抗体的分子识别机制 | 第62页 |
| 6.4 制备了吩噻嗪类药物的单链抗体突变体 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 详细摘要 | 第77-78页 |
