| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略表 | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1 番茄灰霉病的研究 | 第14-17页 |
| 1.1 灰霉菌和番茄灰霉病 | 第14-15页 |
| 1.2 番茄灰霉病的防治 | 第15页 |
| 1.3 灰霉菌致病机制的研究 | 第15页 |
| 1.4 番茄抗病基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 2 MiRNA的研究 | 第17-19页 |
| 2.1 植物miRNA研究进展 | 第17页 |
| 2.2 MiR319的研究 | 第17-19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-34页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 植物 | 第21页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 1.3 培养基与抗生素 | 第21页 |
| 1.4 试剂盒与其他试剂 | 第21-22页 |
| 1.5 主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.1 植物的培养 | 第23页 |
| 2.1.1 拟南芥的种植 | 第23页 |
| 2.1.2 番茄的种植 | 第23页 |
| 2.2 灰霉菌及其孢子的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.1 菌丝的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 孢子的培养 | 第23-24页 |
| 2.3 干旱处理 | 第24页 |
| 2.4 盐处理 | 第24页 |
| 2.5 灰霉菌侵染植物 | 第24-25页 |
| 2.5.1 孢子的获得 | 第24页 |
| 2.5.2 灰霉菌处理番茄 | 第24页 |
| 2.5.3 灰霉菌处理拟南芥 | 第24-25页 |
| 2.6 台盼蓝染色 | 第25页 |
| 2.7 分子检测 | 第25-29页 |
| 2.7.1 TotalRNA提取 | 第25-26页 |
| 2.7.2 磁珠法分离RNA | 第26页 |
| 2.7.3 反转录 | 第26-28页 |
| 2.7.4 PCR | 第28页 |
| 2.7.5 荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 2.8 MiR319过表达载体的构建和转基因植株的产生 | 第29页 |
| 2.8.1 过表达载体的构建 | 第29页 |
| 2.8.2 转基因植株的获得 | 第29页 |
| 2.9 TCP的功能载体的构建和转基因拟南芥的产生 | 第29-34页 |
| 2.9.1 TCPRNAi载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.9.2 TCP过表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.9.3 转基因拟南芥的获得 | 第33-34页 |
| 第三章 实验结果 | 第34-45页 |
| 1 灰霉菌侵染后番茄叶片的分子检测 | 第34-35页 |
| 1.1 MIR319c在灰霉菌侵染的番茄叶片表达变化 | 第34页 |
| 1.2 MiR319c靶基因在灰霉菌侵染的番茄叶片表达检测 | 第34-35页 |
| 2 过表达MiR319c转基因拟南芥分子分析 | 第35-43页 |
| 2.1 转基因拟南芥的阳性鉴定 | 第35-36页 |
| 2.1.1 Kan基因的扩增 | 第35页 |
| 2.1.2 MIR319c在转基因拟南芥表达检测 | 第35-36页 |
| 2.1.3 转基因拟南芥内靶基因的表达检测 | 第36页 |
| 2.2 过表达miR319c增强了拟南芥对灰霉菌的抗性 | 第36-41页 |
| 2.2.1 转基因拟南芥的台盼蓝染色结果 | 第36-38页 |
| 2.2.2 灰霉菌侵染转基因拟南芥后maker基因BIK1的表达检测 | 第38页 |
| 2.2.3 转基因拟南芥中JA/SA途径中相关基因的表达检测 | 第38-39页 |
| 2.2.4 转基因拟南芥内miRNA合成过程中相关蛋白基因的表达检测 | 第39-40页 |
| 2.2.5 MiR319c过表达对其他miRNA的表达影响 | 第40-41页 |
| 2.3 转基因拟南芥的干旱胁迫 | 第41-42页 |
| 2.3.1 转基因拟南芥干旱处理结果 | 第41-42页 |
| 2.3.2 转基因拟南芥干旱后存活率 | 第42页 |
| 2.4 转基因拟南芥的盐胁迫 | 第42-43页 |
| 2.4.1 转基因拟南芥盐胁迫结果 | 第42-43页 |
| 2.4.2 转基因拟南芥盐胁迫后存活率 | 第43页 |
| 3 转基因番茄的分子检测 | 第43-45页 |
| 3.1 转基因番茄中MIR319c及其靶基因的表达检测 | 第43-44页 |
| 3.2 过表达miR319c增强了番茄对灰霉菌的抗性 | 第44-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
