| 致谢 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-27页 |
| 1.1 PRRS的病原学及其检测技术研究进展 | 第10-23页 |
| 1.1.1 PRRS的病原与分类 | 第10页 |
| 1.1.2 PRRS在我国的流行情况 | 第10-12页 |
| 1.1.3 PRRSV的基因组结构 | 第12页 |
| 1.1.4 PRRSV的编码蛋白 | 第12-15页 |
| 1.1.5 PRRSV的遗传变异 | 第15-17页 |
| 1.1.6 PRRSV检测方法 | 第17-20页 |
| 1.1.7 实时荧光PCR技术 | 第20-22页 |
| 1.1.8 PCR-DHPLC技术 | 第22-23页 |
| 1.2 PRRS预警体系 | 第23-26页 |
| 1.2.1 预警及动物疫病预警系统 | 第23页 |
| 1.2.2 PRRS预警系统的基本框架 | 第23-24页 |
| 1.2.3 PRRS预警系统现状分析 | 第24-25页 |
| 1.2.4 对PRRS预警系统的建议 | 第25-26页 |
| 1.3 本研究的目的、意义 | 第26-27页 |
| 第2章 PRRSV SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立 | 第27-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第27页 |
| 2.1.2 方法 | 第27-32页 |
| 2.2 结果 | 第32-35页 |
| 2.2.1 常规RT-PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2.2 PCR扩增片段基因克隆及鉴定 | 第32页 |
| 2.2.3 质粒浓度的计算 | 第32页 |
| 2.2.4 SYBR GreenⅠ实时荧光PCR反应条件的优化 | 第32页 |
| 2.2.5 标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| 2.2.6 特异性评价 | 第33-34页 |
| 2.2.7 敏感性评价 | 第34页 |
| 2.2.8 重复性评价 | 第34页 |
| 2.2.9 在病料检测中的实际应用 | 第34-35页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 PRRSV双重Taq Man实时荧光PCR检测方法的建立 | 第37-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 3.1.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.2 方法 | 第37-42页 |
| 3.2 结果与分析 | 第42-54页 |
| 3.2.1 PRRSV和HP-PRRSV的RT-PCR扩增 | 第42页 |
| 3.2.2 PCR扩增片段克隆及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 质粒浓度的计算 | 第43页 |
| 3.2.4 优化后的PRRSV和HP-PRRSV单一Taq Man实时荧光PCR反应条件 | 第43-45页 |
| 3.2.5 PRRSV和HP-PRRS单一Taq Man实时荧光PCR优化后的反应体系 | 第45页 |
| 3.2.6 PRRSV和HP-PRRS单一Taq Man实时荧光PCR标准曲线 | 第45-47页 |
| 3.2.7 PRRSV和HP-PRRS单一Taq Man实时荧光PCR的特异性 | 第47-48页 |
| 3.2.8 PRRSV和HP-PRRS单一Taq Man实时荧光PCR的灵敏性 | 第48页 |
| 3.2.9 PRRSV和HP-PRRS单一Taq Man实时荧光PCR的重复性 | 第48-49页 |
| 3.2.10 PRRSV和HP-PRRSV双重Taq Man实时荧光PCR结果 | 第49-54页 |
| 3.2.11 Taq Man实时荧光定量PCR对出入境生猪血清样品的检测结果 | 第54页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第54-56页 |
| 第4章 PRRSV PCR-DHPLC检测新技术的建立 | 第56-63页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 4.1.1 毒株、菌株 | 第56页 |
| 4.1.2 仪器和试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.3 试验方法 | 第57-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-61页 |
| 4.2.1 特异性试验 | 第58-59页 |
| 4.2.2 重复性试验 | 第59页 |
| 4.2.3 灵敏度试验 | 第59-60页 |
| 4.2.4 验证试验与应用 | 第60-61页 |
| 4.3 结论与讨论 | 第61-63页 |
| 第5章 检测技术平台在PRRSV预警体系中的应用 | 第63-69页 |
| 5.1 材料与方法 | 第63-64页 |
| 5.1.1 材料 | 第63页 |
| 5.1.2 方法 | 第63-64页 |
| 5.2 结果与分析 | 第64-67页 |
| 5.2.1 进境种猪血清的ELISA检测结果 | 第64页 |
| 5.2.2 进境种猪血清的双重Taq Man实时荧光PCR检测结果 | 第64-65页 |
| 5.2.3 供港生猪血清的ELISA检测结果 | 第65页 |
| 5.2.4 供港生猪血清的实时荧光PCR检测结果 | 第65-66页 |
| 5.2.5 内销养殖场生猪血清的ELISA检测结果 | 第66页 |
| 5.2.6 内销养殖场生猪血清的双重Taq Man实时荧光PCR检测结果 | 第66-67页 |
| 5.3 结论与讨论 | 第67-69页 |
| 5.3.1 进境种猪PRRSV感染情况 | 第67页 |
| 5.3.2 供港和内销猪场生猪PRRSV感染及免疫情况 | 第67-68页 |
| 5.3.3 PRRS预警过程中的监控检测方案 | 第68页 |
| 5.3.4 PRRS预警过程中临床样品监控检测的重要性 | 第68-69页 |
| 研究总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 英文摘要 | 第81-82页 |
| 附录 | 第83页 |
| 附录A 进出境生猪PRRS预警体系框架草案 | 第83-86页 |
| 附录B 缩略词表 | 第86-87页 |
| 附录C 攻博期间发表的文章 | 第87-88页 |
